У працэсе падготовкi транскрыпцыi in vitro (IVT) mRNA, лінейная плазмідная DNA неабходна як транскрыпцыйны шаблон для IVT з дапамогай T7 RNA-полімеразы. Высокая якасць плазміднай DNA крытычна важна для транскрыпцыi in vitro.
На базе даследвання і падготовкі плазміднай платформы, Yaohai Bio-Pharma можа прапанаваць сервіс па падготовцы лінейнай плазміднай DNA высокай чыстасці і стандарту для атрымання эфектывнай транскрыпцыі IVT.
ПРОЦЕС | Апцыянальная служба | Дэталі сервісу | Тэрмін выканання (робальны дзень) |
Падготовка цыркуляванага плазміда | Сінтэз гена | Сінтэз гена (Трэція сторона) | 7-10 |
Ампліфікацыя плазміда | Ампліфікацыя плазміда | 2 | |
Выдзеленне плазміда | |||
Падготовка лінейнага плазміда | Лінейрызацыя і чысценне плазмід | Лінеарызацыя плазміда | 1 |
Чыстка ДНК пасля лінеарызацыі | |||
Кантроль якасці ДНК плазміда | Канцэнтрацыя чыстата | Ультрафіолетавая (UV) спектрафотаметрыя | 1-2 |
Канфігурацыя плазміда | Электрафарэза ў агарасавай гелю (AGE) | ||
Капілярны электрафарэз (CE)-додатковы | |||
Адыдэнтыфікацыя плазміда | Ідэнтыфікацыя рэстрацыйным энзымам/ЭАГ |
Гнучкае выбар лінейных метадаў
Аптымізацыя метадаў выцягнення і чысткі ДНК для дасягнення высокіх ступеней аднаўлення.
Строгія стандарты кантролю працэса, з удзелам суперспіральнай канфігурацыі плазмідных пробы для даследвання больш за 80%.
Прынцыпы высокага ўзроўню і эфектыўнасці падготовкі плазмід і службовага контролю якасці для задаволення експерыментальных патрабаванняў.
Узяўшы як прыклад продукт mRNA_luciferase Cataлогу Yaohai Bio-Pharma, транскрыпцыйная плазмідная проба (даследчая ступень) мае баланс суперспіральнасці больш за 90%, лінейнасць набліжаецца да 100%, а наступныя транскрыпцыйныя адносіны дасягаюць 1:200 (лінейная ДНК плазміды:мРНК).
МРНК_luciferase, атрымленае праз падготовку лінейнай плазміды як шаблона, трансфактуєся ў клеткі 293T, і актыўнасць фермента-падставы ацэняецца праз 24 гадзіны пасля трансфакцыі.
Можна выяўляць чырвоназорны сігнал дзеяння люцыферазы, гэта значыць, белак люцыферазы эфектыўна экспрымаваны, што падтварае, што чысцота транскрыпцыйнага шаблона цалкам задавольняе спраў жаданага якаснага падготовку mRNA.
Асесіраванне адносіны суперспіраных плазмід
Падтварэнне экспрысіі mRNA люцыферазы in vitro