У супоставленні з двухэтапнай энзыматычнай капсуваннай, аднаэтапны спосаб спачатковай капсуванні можа значна спрасці процэс. Гэты метад заснаваны на дадзенні кап-аналагаў да реакцыі транскрыпцыі вяршэння (IVT). Кап-аналогі могуць быць ўведзеныя ў час транскрыпцыі, і пасля яе завяршэння атрымліваецца mRNA з кап-структурай. Сучасныя трэцяга паколеньня кап-аналогі могуць уяўляць кап 1 структуру напрамую без зваротнай капсуванні.
У звязку з імунагеннасцю mRNA ў живых арганізмах і эфектыўнасцю трансляцыі, працэс IVT часта выкарыстоўвае пэўныя тыпы модифікаваных НТП, і часта ўжываліся модифікаваныя нуклеатыды: псевдуюрыдыны (Ψ), N1-метыл-псевдуюрыдына (N1Ψ) і 5-метылсытызін (5mC).
Рысунак: Схема кутранскрыпцыйнай капінга mRNA
Дэталі сервісу
Сервіс |
Дэталі сервісу |
Тэрмін выканання (робальны дзень) |
Кутранскрыпцыйнае капінга |
Эксперыментальная транскрыпцыя ў тэsts (Чысты аналог капа) |
1-2 |
| Модифікацыі нуклеатадаў (Ψ/ N1Ψ/ 5mC) |
| Выдаленне ДНК-шаблона (ДНаза I) |
Аптымізацыя умоваў IVT - неабходна |
Дызайн і аптымізацыя кампанентаў реакцыі |
3-7 |
Нашы харастыкі
- Змешаныя стратэгіі нуклеатаднай модыфікацыі
Колькіść даступных стратэгій нуклеатаднай модыфікацыі можа павысіць экспрэсію белка.
- Аптымізаваная сістэма реакцыі
Дасягнуць высоцеі пропорцыі транскрыпцыі і высоцеі эфектыўнасці капіння.
Дасягнуць ступені капіння больш за 95%.
Эфектыўна спраўляць з дэградацыяй mRNA праз сціліўную кантроль RNase ў эксперыментальнай сродовіне і патрабах.
Прыклад даследвання
Yaohai Bio-Pharma усталяла дозрэлы платфармую працэсу спалучнага капінга, выкарыстоўваючы чыстыя кап-аналогі, каб напрамую дадаць структуру Cap1, узяўшы ў улік абвежанне адваротнага капінгу. Пасля стандартнай папярэдняй абароцкі пробы і дэтэкцыі капілярнай электрафарэз (CE), ступень капінгу mRNA збуйнага зеленага флуорэсцэнтнага белка (eGFP) можа дасягнуць больш 95%.
эфектыўнасць капінгу mRNA eGFP больш 95%
MRNA eGFP і mRNA mCherry, падгатаваныя спалучным капінгам, трансфіруюцца ў клеткі 293T адпаведна, і пасля 48 гадзін наблізуецца сільны флуорэсцэнтны сигнал, што свідоміць аб тым, што mRNA ефектыўна экспрыміруецца ў клетках 293T.
Экспрысія mRNA eGFP і mRNA mCherry ў клетцы 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
