Карыстацкі сінтэз saRNA
Самаўзмацняльная мРНК (saRNA), таксама вядомая як рэплікон РНК, кадуе паслядоўнасці мРНК транскрыпцыі in vitro (IVT) і гены віруснай рэпліказы, атрыманыя з альфавіруса або флавівіруса. Гены віруснай рэпліказы дазваляюць самаампліфікаваць мРНК, што прыводзіць да павелічэння экспрэсіі бялку і мінімальнай неабходнай дозы РНК у параўнанні з мРНК без ампліфікацыі. Іншы аспект заключаецца ў тым, што saRNA - гэта адносна вялікая малекула (больш за 14 кб).
Кампанія Yaohai Bio-Pharma стварыла набор тэхналогій сінтэзу мРНК для забеспячэння мРНК без ампліфікацыі і мРНК з самаампліфікацыяй (1000 нт~14000 нт), такіх як распрацоўка і аптымізацыя паслядоўнасці, IVT, ачыстка, ліяфілізацыя і інкапсуляцыя ліпідных наначасціц (LNP). . Уся прадукцыя выпускаецца ў адпаведнасці са строгімі стандартамі кантролю якасці.
Мал.1. Структурныя асаблівасці мРНК IVT: звычайная, кругавая і самаампліфікацыйная мРНК.
Асаблівасці паслядоўнасці самаампліфікацыйнай мРНК
Самаўзмацняльная РНК складаецца з чатырох неструктурных бялкоў (пазначаных як nsP1, nsP2, nsP3 і nsP4), якія паходзяць з альфавірусаў, віруса венесуэльскага энцэфаліту коней (VEEV). Сярод іх nsP1 праяўляе двайную ферментатыўную актыўнасць, а менавіта GTase і N7MTase, у той час як nsP2 валодае актыўнасцю RTPase, асноўнай для абмежавання мРНК IVT для стварэння структуры Cap 0. Акрамя таго, nsP2 служыць пратэазай і геліказай, палягчаючы складаную апрацоўку ўсяго комплексу nsP. Дакладная функцыя nsP3 застаецца няўлоўнай, але ён уступае ва ўзаемадзеянне з рознымі вавёркамі клеткі-гаспадара, тым самым спрыяючы паслабленню супрацьвіруснага адказу, усталяванага гаспадаром.
Вобласць субгеномного прамотара альфавіруса (SGP) размешчана перад цікавым генам (GOI). Элемент SGP палягчае ініцыяцыю транскрыпцыі GOI, абмінаючы счытванне паслядоўнасці, якая кадуе вірусныя бялкі nsP.
Мал.2 Сінтэз і клеткавы аналіз eGFP saRNA платформы Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Індывідуальныя рашэнні saRNA
Пратакол сінтэзу саРНК аналагічны мРНК: Карыстальніцкі сінтэз мРНК
- Дызайн паслядоўнасці
- Падрыхтоўка шаблону плазміды
- транскрыпцыя in vitro (IVT)
- Ферментатыўнае капіраванне мРНК
- Капіраванне сумеснай транскрыпцыі мРНК
- Ачыстка мРНК
- Лиофилизация мРНК
- Інкапсуляцыя LNP
- Аналіз і тэставанне
BE
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
MK
UR
BN
