Yaohai Bio-Pharma падготавляе circRNA на аснове сістэмы PIE (выраўноўванне экзонав і інтрон), якая спрыймае цыкляванне RNA за дапамогай самасплайсынга type I інтрон. Сістэма PIE дызайнаваная з выкарыстаннем гена T4 td ці рыбачага прэкурсора tRNA, і артыкуляцыя выглядае так:
Інтрон RNA і падтрымліваючы фрагмент экзона дзеліцца на дві часткі (5' тэрмінальную і 3' тэрмінальную), дзе 5' тэрмінальная паследовательнасць пераносіцца ў хвост целавой паследовательнасці, 3' тэрмінальная паследовательнасць ўсталяецца перад целавай паследовательнасцю, а целавая геновая паследовательнасць ўсталяецца па серэдзіне.
Пад каталязай GTP, структура PIE прыводзіць да цыклізацыі секвенцаў, якія не ўключалі сябе ў інтрон. Злучана з рацыянальнай стратэгіяй павелічэння швиддасці цыклізацыі, Yaohai Bio-Pharma можа атрымаць цыклізацыю секвенцаў да 4 kb з швиддасцю цыклізацыі больш за 80%.
Рысунак 1. У магутках цыркуляцыі circRNA на аснове сістэмы PIE
Дэталі служб
| ПРОЦЕС |
Апцыянальная служба |
Дэталі сервісу |
Тэрмін выканання (робальны дзень) |
| дэзынатаж і аптымізацыя circRNA |
Праектаванне і аптымізацыя кодуючых паследавательнасцей |
Выравнянне паследавательнасці CDS
Аптымізацыя кодонавай паследавательнасці CDS
|
1 |
| Праектаванне і аптымізацыя не кодуючых паследавательнасцей |
Дызайн і аптымізацыя паслядоўнасцей інтронаў і экзонав
Дызайн і аптымізацыя паслядоўнасці гамалагічных рукав
Дызайн і аптымізацыя паслядоўнасці прасторы
|
1-2 |
Звычайныя стратэгіі дызайну паслядоўнасці mRNA
| Кампаненты CircRNA |
Біялогічныя функцыі |
Стратэгіі аптымізацыі |
| Дwuконцевыя паслядоўнасці інтронаў і экзонав |
Самастойнае сплітаванне інтрона ў GTP-каталізаваным рэжыме для цыклізацыі паслядоўнасцей за межамі інтрона. |
Дызайнавана па гена T4 td ці рыбацкім аснове tRNA-папярэдніка. |
| Кадыраванне |
IRES |
Унутраны сацыямый распаўніцца, які рэгулюе тэрмінацыю circRNA. |
Абвядомленне паслядоўнасцей унутранага сацыямога ўваходнага сайту (IRES) з розных вірусных джаржаў, напрыклад, EMCV, CVB3 джаржаў. |
| КДС |
Рэгіёны, якія кодуюць белкі, паслядоўнасці, якія кодуюць антыгены, антыкусы ці іншыя функцыянальныя белкі. |
Оптымізацыя каодона павялічвае ўзровень тэрмінацыі; некаторыя неоптымалныя каодоны можуць мець ролю ў складанні белка. |
| Някадыраваныя |
Някадыраваныя паслядоўнасці |
Цэлі miRNA ці белкі, каб выканаць рэгуляцыю гена ці белка. |
Направленне на спецыфічныя прывязалыя месцы для miRNA ці белкі можа паўторыць сягвы последавательнасці прывязалога месца. |
Нашы харастыкі
- Аптымізаваная сістэма PIE Цыклізацыі. Камбінатацыя з разумнымі стратэгіямі аптымізацыі, каб дасягнуць ступені цыклізацыі больш за 80%;
- Пачатковая каманда аптымізацыі CDS. Супрацоўніцтва з камандай прафесійных алгарытмаў AI, каб завяршыць аптымізацыю кодонавага рэгіёна CDS;
- Дораслы і даканальны працэс circRNA можа быць дасягнуты з високай эфектыўнасцю цыклізацыі, високай стабільнасцю і високай эфектыўнасцю перакладу.
Прыклад даследвання
Yaohai Bio-Pharma запусціла кантрольны продукт — падзелены зелёны флуорэсцэнтны белок (eGFP) circRNA, які базіруецца на сістэме PIE, каб дасягнуць цыклізацыі RNA.
З дапамогай звычайнага рэагента для трансфекцыі, eGFP circRNA трансфікуецца ў клеткі 293T, і пасля 24 гадзін можна зафіксаваць флуорэсцэнтны сігнал eGFP (зялены), які пасіліцца праз 48 гадзін. Флуорэсцэнтны сігнал можна захаваць на 7-ы дзень і 14-ы дзень пасля трансфекцыі.
Даўная вярэфікацыя экспresasii eGFP circRNA in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
