الـ mRNA ذاتية التضخيم (saRNA)، والمعروفة أيضًا باسم RNA المُعيد، تحتوي على تسلسلات mRNA المُنتجة في المختبر (IVT) وجينات مُضاعف الفيروس المستمدة من الفيروس ألفا أو الفيروسات الشبيهة بالفيروسات. تسمح جينات مضاعف الفيروس بتضخيم الـ mRNA ذاتيًا، مما يؤدي إلى زيادة إنتاج البروتين وتقليل الجرعة المطلوبة من RNA مقارنةً بالـ mRNAs غير المتضخمة. جانب آخر هو أن الـ saRNA عبارة عن جزيء نسبيًا كبير (أكثر من 14 كيلو باز).
قامت Yaohai Bio-Pharma بتطوير مجموعة من تقنيات تصنيع الـ mRNA لتوفير الـ mRNA غير المتضخمة والـ mRNA ذاتية التضخيم (من 1000 nt إلى 14000 nt)، مثل تصميم وتحسين التسلسلات، IVT، التنقية، التجفيف والتغليف باستخدام جسيمات النانو الدهنية (LNP). يتم إطلاق جميع المنتجات وفق معايير صارمة للتحكم في الجودة.
الشكل 1: السمات الهيكلية للـ IVT mRNAs: التقليدية، الدائرية والمُتَضَخِّمة ذاتيًا.
يشمل الحمض النووي الريبي الذاتي التضخيم أربعة بروتينات غير هيكلية (تُسمى nsP1، nsP2، nsP3 وnsP4)، والتي تستمد من الفيروسات ألفا، فيروس التهاب الدماغ الفينيزي (VEEV). ومن بين هذه، يظهر nsP1 نشاطين إنزيميَّين وهما GTase وN7MTase، بينما يمتلك nsP2 نشاط RTPase، وهو أمر حاسم لإغلاق الحمض النووي الريبي المtranسكت بواسطة IVT لإنتاج بنية Cap 0. بالإضافة إلى ذلك، يعمل nsP2 كبروتياز وهيليكاز، مما يسهل معالجة تعقيدات كاملة للتعقيد nsP. لا تزال الوظيفة الدقيقة لـ nsP3 غامضة، لكنها تتداخل مع مجموعة متنوعة من بروتينات الخلية المضيفة، مما يساهم في تخفيف استجابة مضادة للفيروس التي تقوم بها المضيفة.
يقع منطقة المروج الفرعية للفيروس ألفا (SGP) قبل جين الاهتمام (GOI). يساعد العنصر SGP في بدء عملية النسخ لجين الاهتمام عن طريق تجاوز قراءة التسلسل الذي يشفر البروتينات غير الهيكلية الفيروسية.
الشكل 2: التركيب والاختبارات الخلوية لـ saRNA الخاص ببروتين eGFP من منصة Yaohai Bio-Pharma RNASci.
بروتوكول تركيب saRNA مشابه لبروتوكول mRNA: تصنيع mRNA المخصص