W procesie przygotowania mRNA do transkrypcji in vitro (IVT) wymagany jest linearyzowany plazmidowy DNA jako matryca transkrypcji dla IVT za pomocą polimerazy RNA T7. Wysokiej jakości plazmidowy DNA ma kluczowe znaczenie dla transkrypcji in vitro.
W oparciu o platformę usług przygotowania dojrzałego plazmidu, Yaohai Bio-Pharma może zaoferować usługę przygotowania linearyzowanego plazmidowego DNA o wysokiej czystości i wysokim standardzie w celu osiągnięcia wydajnej transkrypcji IVT.
Szczegóły usług
| Przetwarzanie | Usługa opcjonalna | Szczegóły usługi | Okres dostawy (dzień roboczy) |
| Przygotowanie plazmidu kołowego | Synteza genów | Synteza genów (strona trzecia) | 7-10 |
| Amplifikacja plazmidu | Amplifikacja plazmidu | 2 |
| Ekstrakcja plazmidu |
| Linearyzowane przygotowanie plazmidu | Linearyzacja i oczyszczanie plazmidów | Linearyzacja plazmidu | 1 |
| Linearyzacja oczyszczania DNA |
| Kontrola jakości plazmidowego DNA | Czystość stężenia | Spektrofotometria ultrafioletowa (UV). | 1-2 |
| Konformacja plazmidu | Elektroforeza w żelu agarozowym (AGE) |
| Elektroforeza kapilarna (CE) – opcjonalnie |
| Identyfikacja plazmidu | Identyfikacja enzymu restrykcyjnego/ AGE |
Nasze funkcje
- Plazmid szablonowy FreeCut
Elastyczny dobór metod linearyzacji
Optymalizacja metod ekstrakcji i oczyszczania DNA w celu osiągnięcia wysokiego współczynnika odzysku.
- Rygorystyczna kontrola jakości
Surowe standardy kontroli procesu, z współczynnikiem konformacji superhelikalnej próbek plazmidów do badań wynoszącym ponad 80%.
- Proces dojrzałej platformy
Wysoki standard i wysoka wydajność usług przygotowania plazmidów i kontroli jakości w celu zaspokojenia potrzeb eksperymentalnych.
Case study
Biorąc za przykład produkt mRNA_lucyferase z katalogu Yaohai Bio-Pharma, próbka plazmidu matrycy transkrypcji (stopień badawczy) ma współczynnik superhelikalny większy niż 90%, współczynnik linearyzacji bliski 100%, a następnie współczynnik transkrypcji do 1:200 ( linearyzowany plazmidowy DNA:mRNA).
mRNA_lucyferaza uzyskana poprzez przygotowanie linearyzowanego plazmidu jako matrycy transfekuje się komórki 293T, a aktywność reakcji enzym-substrat ocenia się 24 godziny po transfekcji.
Można wykryć oczywisty silny sygnał aktywności lucyferazy, tj. białko lucyferazy ulega wydajnej ekspresji, co sugeruje, że czystość matrycy transkrypcyjnej może w pełni spełniać wymagania wysokiej jakości przygotowania mRNA.
Test proporcji superskręconego plazmidu
Walidacja ekspresji mRNA lucyferazy in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NIE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
