Przygotowanie CircRNA wymaga liniowego RNA jako materiału prekursorowego (prekursora RNA) do cyklizacji, przy czym prekursor RNA jest zwykle przygotowywany przy użyciu linearyzowanego plazmidowego DNA jako matrycy transkrypcji i poddawany transkrypcji in vitro za pomocą polimerazy RNA T7.
Wysokiej jakości plazmidowy DNA jest niezbędny do transkrypcji in vitro (IVT). W oparciu o platformę usług przygotowania dojrzałego plazmidu, Yaohai Bio-Pharma może świadczyć usługi przygotowania linearyzowanego plazmidowego DNA (pDNA) o wysokiej czystości i standardowym, aby zapewnić integralność produktów IVT.
Szczegóły usług
| Przetwarzanie |
Usługa opcjonalna |
Szczegóły usługi |
Okres dostawy (dzień roboczy) |
| Przygotowanie plazmidu kołowego |
Synteza genów |
Synteza genów (strona trzecia) |
7-10 |
| Amplifikacja plazmidu |
Amplifikacja plazmidu |
2 |
| Ekstrakcja plazmidu |
| Linearyzowane przygotowanie plazmidu |
Linearyzacja i oczyszczanie plazmidów |
Linearyzacja plazmidu |
1 |
| Linearyzacja oczyszczania DNA |
| Kontrola jakości plazmidowego DNA |
Czystość stężenia |
Spektrofotometria ultrafioletowa (UV). |
1-2 |
| Konformacja plazmidu |
Elektroforeza w żelu agarozowym (AGE) |
| Elektroforeza kapilarna (CE) – opcjonalnie |
| Identyfikacja plazmidu |
Identyfikacja enzymu restrykcyjnego/ AGE |
Nasze funkcje
- Plazmid szablonowy FreeCut
Elastyczny dobór metod linearyzacji
Optymalizacja metod ekstrakcji i oczyszczania DNA w celu osiągnięcia wysokiego współczynnika odzysku.
- Rygorystyczna kontrola jakości
Surowe standardy kontroli procesu, z współczynnikiem konformacji superhelikalnej próbek plazmidów do badań wynoszącym ponad 80%.
- Proces dojrzałej platformy
Wysoki standard i wysoka wydajność usług przygotowania plazmidów i kontroli jakości w celu zaspokojenia potrzeb eksperymentalnych.
Case study
Biorąc za przykład produkt mCherry circRNA firmy Yaohai Bio-Pharma, stosunek superskręconych próbek plazmidu matrycowego do transkrypcji (stopień badawczy) wynosi ponad 70%, przy współczynniku linearyzacji bliskim 100%.
mCherry circRNA przygotowuje się z linearyzowanego plazmidu jako matrycy i transfekuje komórki 293T. Wysoki poziom ekspresji fluorescencji (czerwona fluorescencja) wykrywa się po 24 godzinach transfekcji, który zostanie wzmocniony po 48 godzinach i nadal można go wykryć 7 i 14 dnia po transfekcji.
Białko mCherry ulega stabilnej i wydajnej ekspresji, a czystość matrycy transkrypcyjnej może spełniać wymagania produktu leczniczego circRNA (DP) o wysokiej jakości.
Walidacja ekspresji in vitro mCherry circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NIE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
