W porównaniu z dwuetapowym enzymatycznym zamykaniem, jednoetapowa metoda kotranskrypcji może znacznie zmniejszyć przebieg procesu. Metoda jest zorientowana na wyniki i obejmuje dodanie analogów kapu do reakcji transkrypcji in vitro (IVT). Analogi czapeczki można wprowadzić na początku transkrypcji, a mRNA ze strukturą czapeczki można otrzymać po zakończeniu transkrypcji. Obecne analogi czapeczki trzeciej generacji mogą uniknąć odwrotnego cappingu i bezpośrednio dodawać strukturę Cap 1 do produktu transkrypcji.
Ze względu na immunogenność i skuteczność translacji mRNA in vivo w procesie IVT często przyjmuje się pewne rodzaje zmodyfikowanych NTP, a powszechnymi modyfikowanymi nukleotydami są pseudourydyna (Ψ), N1-metylopseudourydyna (N1Ψ) i 5-metylocytozyna (5mC) .
Rysunek: Schemat reakcji kotranskrypcji i reakcji cappingu mRNA
Szczegóły usługi
Usługi | Szczegóły usługi | Okres dostawy (dzień roboczy) |
Capping kotranskrypcyjny | Odpowiedź transkrypcyjna in vitro (analog Clean Cap) | 1-2 |
| Modyfikacje nukleotydów (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Usuwanie matrycy DNA (DNaza I) |
Optymalizacja stanu IVT – opcjonalna | Projektowanie i optymalizacja elementów reakcji | 3-7 |
Nasze funkcje
- Zróżnicowane strategie modyfikacji nukleotydów
Wiele opcjonalnych strategii modyfikacji nukleotydów może poprawić ekspresję białka.
- Zoptymalizowany system reakcji
Osiągnij wysoki współczynnik transkrypcji i wysoką wydajność zamykania.
- Stabilny proces zamykania
Osiągnij poziom ograniczenia powyżej 95%.
Skutecznie zapobiegaj degradacji mRNA poprzez ścisłą kontrolę RNazy w środowisku eksperymentalnym i materiałach eksploatacyjnych.
Case study
Firma Yaohai Bio-Pharma zbudowała dojrzałą platformę procesu kotranskrypcyjnego zamykania, wykorzystując analogi czystej czapeczki do bezpośredniego dodawania struktury Cap1, unikając jednocześnie odwrotnego zamykania. Po standaryzowanej obróbce wstępnej próbki i wykryciu metodą elektroforezy kapilarnej (CE), stopień zamykania mRNA o wzmocnionym białku zielonej fluorescencji (eGFP) może osiągnąć ponad 95%.
Skuteczność zamykania mRNA eGFP powyżej 95%
mRNA eGFP i mRNA mCherry przygotowane przez czapeczkę kotranskrypcyjną transfekuje się odpowiednio do komórek 293T, a po 48 godzinach obserwuje się silny sygnał fluorescencyjny, co sugeruje, że mRNA ulega skutecznej ekspresji w komórkach 293T.
Ekspresja mRNA eGFP i mRNA mCherry w komórce 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NIE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
