Okrągły mRNA (circRNA) jest szeroko stosowany w badaniu funkcji genów lub białek. Tymczasem jest popularny w opracowywaniu profilaktycznych i terapeutycznych leków biologicznych, podobnych do mRNA.
Yaohai Bio-Pharma opracowała zestaw technologii syntezy circRNA w celu zapewnienia wysokiej jakości RNA, takich jak projektowanie i optymalizacja sekwencji, transkrypcja in vitro (IVT), cyrkulacja/cyklizacja, oczyszczanie i kapsułkowanie nanocząstek lipidowych (LNP). Wszystkie produkty są wydawane zgodnie z rygorystycznymi standardami kontroli jakości (QC).
W porównaniu z liniowym mRNA, kolisty RNA (circRNA) ma bardziej stabilną strukturę i jest głównym gorącym punktem w bieżących badaniach nad lekami na bazie kwasów nukleinowych. Ma szeroki zakres zastosowań w różnych dziedzinach, czy to jako kodujący circRNA, czy niekodujący circRNA, w tym szczepionki profilaktyczne przeciwko chorobom zakaźnym, terapeutyczne szczepionki onkologiczne, terapeutyczne leki onkologiczne, białkową terapię zastępczą, medycynę regeneracyjną, terapię komórkową i genową (CGT) , rola gąbki molekularnej i aptamer RNA.
Przetwarzanie | Usługa opcjonalna | Szczegóły usługi | Okres dostawy (dzień) |
Projektowanie i optymalizacja sekwencji circRNA | Projektowanie i optymalizacja sekwencji kodujących | Optymalizacja kodonów CDS | 1 |
Projektowanie i optymalizacja sekwencji niekodujących | Sekwencja intronów i eksonów, projektowanie i optymalizacja ramion homologicznych i odstępników | 1-2 | |
Przygotowanie plazmidu kołowego | Synteza genów | Synteza genów (strona trzecia) | 7-10 |
Amplifikacja plazmidu | Amplifikacja plazmidu | 2 | |
Ekstrakcja plazmidu | |||
Linearyzowane przygotowanie plazmidu | Linearyzacja i oczyszczanie plazmidów | Linearyzacja plazmidu | 1 |
Linearyzacja Oczyszczanie DNA | |||
Transkrypcja i cyklizacja in vitro | Transkrypcja i cyklizacja in vitro | Reakcje transkrypcji i cyklizacji in vitro | 1-2 |
Trawienie RNazą R | |||
Optymalizacja - opcjonalna | Skład reakcji, optymalizacja czasu | 2-5 | |
Oczyszczanie circRNA | Konwencjonalna metoda oczyszczania | Wytrącanie chlorku litu | 1 |
Oczyszczanie kulkami magnetycznymi | 1 | ||
Wysoce czyste oczyszczanie circRNA | Preparatywna wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC) | 1-2 | |
Wymiana buforów | Ultrafiltracja | 1 | |
circRNA Liofilizacja | Próbne wypełnienie | Wypełnienie | 2-3 |
Liofilizacja | Wstępne zamrażanie | ||
Suszenie pierwotne (sublimacja) | |||
Suszenie wtórne (desorpcja) | |||
Kapsułkowanie circRNA-LNP | Enkapsulacja LNP | Wstępna obróbka materiału i cieczy | 2 |
Mieszanie urządzeń mikroprzepływowych | |||
Wymiana buforów | Filtracja z przepływem stycznym | 1 | |
wysterylizowany | Sączenie | ||
Kontrola jakości plazmidowego DNA | Stężenie/czystość | Spektrofotometria ultrafioletowa (UV). | 1-2 |
Konformacja plazmidu | Elektroforeza w żelu agarozowym (AGE) | ||
Elektroforeza kapilarna (CE) – opcjonalnie | |||
Identyfikacja plazmidu | Identyfikacja enzymu restrykcyjnego/WIEK | ||
Kontrola jakości circRNA | Stężenie/czystość | Spektrofotometria ultrafioletowa (UV). | - |
Czystość | Elektroforeza w żelu agarozowym (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC – opcjonalnie | 1 | ||
Kontrola jakości circRNA-LNP | Wydajność kapsułkowania | Metoda RiboGreena | 1 |
Rozmiar cząsteczki | Dynamiczne rozpraszanie światła (DLS) | 1 | |
Indeks polidyspersyjności | Dynamiczne rozpraszanie światła (DLS) | 1 | |
Potencjał zeta | Dynamiczne rozpraszanie światła (DLS) | 1 | |
Test mocy oparty na komórkach | Transfekcja komórkowa | Posiew komórek, transfekcja komórek | 4 |
Wykrywanie białka docelowego | Obserwacja fluorescencji, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Transfekowaliśmy wzmocnione zielone białko fluorescencyjne circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, lucyferazę circRNA do komórek 293T i wykryliśmy docelowe białko poprzez fluorescencję, luminescencję lub sygnał koloru, western blot (WB), enzymatyczny test immunoabsorpcyjny (ELISA).
Komórkowe testy mocy próbek circRNA firmy Yaohai Bio-Pharma