Yaohai Bio-Pharma przygotowuje circRNA w oparciu o system PIE (urównanie eksonów i intronów), który opiera się na funkcji samosplicingu intronów typu I w celu osiągnięcia cyklizacji RNA. Strukturę PIE zaprojektowano przy użyciu genu T4 td lub genu prekursora rybiego tRNA, a układ jest następujący:
Intron RNA i fragment egzonu pomocniczego są podzielone na dwie części (koniec 5' i koniec 3'), gdzie sekwencja końca 5' jest przenoszona na ogon sekwencji docelowej, sekwencja końca 3' jest wstawiana z przodu sekwencję docelową, a docelowa sekwencja genu jest wstawiana w środku.
Pod wpływem katalizy GTP struktura PIE prowadzi do cyklizacji sekwencji innych niż introny. W połączeniu z rozsądną strategią zwiększania szybkości cyklizacji, Yaohai Bio-Pharma może osiągnąć cyklizację sekwencji o wielkości do 4 kb przy szybkości cyklizacji przekraczającej 80%.
Rycina 1. Cyrkulacja in vitro circRNA w oparciu o system PIE
Szczegóły usług
| Przetwarzanie | Usługa opcjonalna | Szczegóły usługi | Termin dostawy (dzień roboczy) |
| Projektowanie i optymalizacja sekwencji circRNA | Projektowanie i optymalizacja sekwencji kodujących | Dopasowanie sekwencji CDS Optymalizacja kodonów CDS | 1 |
| Projektowanie i optymalizacja sekwencji niekodujących | Projektowanie i optymalizacja sekwencji intronów i eksonów Projektowanie i optymalizacja sekwencji ramion homologicznych Projektowanie i optymalizacja sekwencji odstępników | 1-2 |
Typowe strategie projektowania sekwencji mRNA
| Składniki CircRNA | Funkcje biologiczne | Strategie optymalizacji |
| Dwukońcowe sekwencje intronów i eksonów | Samosplatanie intronów katalizowane GTP w celu cyklizacji sekwencji poza intronem. | Zaprojektowane zgodnie z genem T4 td lub genem prekursora tRNA oleju rybnego. |
| Kodowanie | IRES | Wewnętrzne miejsce rozpoznawania rybosomów, które reguluje translację circRNA. | Skrining sekwencji wewnętrznego miejsca wejścia rybosomu (IRES) z różnych źródeł wirusowych, np. źródeł EMCV, CVB3. |
| CDS | Regiony kodujące białka, sekwencje kodujące antygeny, przeciwciała lub inne białka funkcjonalne. | Optymalizacja kodonów zwiększa poziom translacji; pewne nieoptymalne kodony mogą odgrywać rolę w fałdowaniu białek. |
| Bez kodowania | Sekwencje niekodujące | Celuj w miRNA lub białka, aby wywierać regulację genów lub białek. | Celowanie w określone miejsca wiązania miRNA lub białek może powtarzać sekwencje miejsca wiązania. |
Nasze funkcje
- Zoptymalizowany system cyklizacji PIE Połączenie z rozsądnymi strategiami optymalizacji w celu osiągnięcia współczynnika cyklizacji powyżej 80%;
- Najnowocześniejszy zespół ds. optymalizacji CDS Współpraca z profesjonalnym zespołem algorytmów AI w celu zakończenia optymalizacji kodonów regionu CDS;
- Dojrzały i doskonały proces circRNA można osiągnąć dzięki wysokiej wydajności cyklizacji, wysokiej stabilności i wysokiej wydajności translacji.
Case study
Firma Yaohai Bio-Pharma wprowadziła na rynek produkt kontrolny wzmocniony białkiem zielonej fluorescencji (eGFP) circRNA, oparty na systemie PIE w celu osiągnięcia cyklizacji RNA.
Przy użyciu konwencjonalnego odczynnika do transfekcji, eGFP circRNA transfekuje się komórki 293T, a sygnał fluorescencyjny eGFP (zielony) można wykryć po 24 godzinach, który zostanie wzmocniony po 48 godzinach. Sygnał fluorescencyjny można nadal wykryć 7. i 14. dnia po transfekcja.
Walidacja ekspresji in vitro circRNA eGFP
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NIE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
