Znaczenie testu siły mRNA
Wraz z szybkim rozwojem szczepionek i leków mRNA potrzebny jest specyficzny panel metod analitycznych do badania siły działania (określania ich aktywności biologicznej), obejmującej skuteczność translacji mRNA. Metody te zazwyczaj opierają się na transfekcji komórek i testach funkcjonalnych docelowego białka.
Yaohai Bio-Pharma oferuje oparte na komórkach testy mocy substancji leczniczych mRNA lub produktów LNP, w tym transfekcję komórek (komórki 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 itp.) oraz testy ELISA lub Western Blott (WB).
Wymagania regulacyjne dotyczące testów mocy
Zgodnie z ustaleniami regulacyjnymi WHO: „Siła działania każdej serii końcowej szczepionki powinna zostać określona przy użyciu odpowiednio ilościowych i zwalidowanych metod funkcjonalnych. Potencjalne testy siły działania in vitro mogą obejmować systemy transfekcji oparte na komórkach lub testy bezkomórkowe. USP zaleciło „test komórkowy” w celu sprawdzenia siły mRNA, tj. ekspresji docelowego białka.
Procedura
Krok 1. Transfekcja komórkowa mRNA lub mRNA-LNP
Komórki hoduje się i transfekuje mRNA lub mRNA-LNP. Szczegółowo, mRNA transfekuje się po zmieszaniu z odczynnikiem do transfekcji, podczas gdy mRNA-LNP transfekuje się bezpośrednio do komórek. Po 24-48 godzinach sklaruj supernatant zawierający eksprymowane białko przez odwirowanie.
Krok 2. Testy funkcjonalne białka docelowego
Wykonaj testy ELISA lub WB, aby ocenić funkcjonalne wiązanie docelowych białek.
Studium przypadku
Komórkowe testy siły próbek mRNA
Yaohai-BioPharma opracowała komórkową metodę oznaczania siły działania mRNA, obejmującą hodowlę komórkową, transfekcję komórek i testy funkcjonalności białek. Transfekowaliśmy mRNA eGFP, mRNA mCherry, mRNA lucyferazy, mRNA białka kolczastego do komórek 293T i wykrywaliśmy białko docelowe poprzez sygnał fluorescencji, luminescencyjny lub kolorowy, WB, ELISA.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NIE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
