modyfikacja 5'-końca mRNA jest niezbędną modyfikacją mRNA. mRNA z strukturami kapowymi, zwłaszcza strukturami Cap1, ułatwiają mRNA unikanie odpowiedzi immunologicznych w organizmie, co prowadzi do efektywnego przekładu białek.
Kapowanie enzymatyczne (metoda dwuetapowa) to konwencjonalna metoda kapowania mRNA, podobna do procesu kapowania w organizmach eukariotycznych. W wyniku działania serii enzymów, 7-metyloguanina (m7G) jest powiązana z 5'-końcem mRNA za pośrednictwem wiązania trifosforanowego 5'-5' i ulega modyfikacji metylacji, tworząc strukturę kapową Cap 1 (m7GpppN).
Schemat powstania naturalnej struktury kapowej
Przebieg reakcji enzymatycznego kapowania wygląda następująco:
Plazmid DNA liniaryzowany jest używany jako szablon dla transkrypcji in vitro (IVT) w obecności polimerazy T7, a mRNA z strukturą kapową na końcu 5' jest formowane po jednoetapowej czystce przy użyciu enzymu kapującego wirusa ospowatego i 2'-O-metyletransferazy.
Szczegóły usług
Opcjonalne Usługi |
Szczegóły usług |
Okres dostawy (Dzień) |
enzymatyczne zakonczenie mRNA |
Reakcja enzymatycznego zakonczenia |
1 |
Optymalizacja reakcji zakonczenia - opcjonalna |
Projektowanie i optymalizacja składników reakcji |
3~7 |
Nasze cechy
- Projektowanie i optymalizacja składnika reakcji zakonczenia
Składnik reakcji zakonczenia został zoptymalizowany, a produkcja transkrypcji mRNA wzrosła znacznie.
- Weryfikacja wyrażania in vitro
Zakonczone mRNA jest transfekowane do komórek 293T, a wyrażanie białka docelowego może zostać wykryte.
- Swoisty kontrolowany RNase
Dzięki suitycznej kontroli RNase w środowisku doświadczalnym i materiałach zużywalnych, efektywnie zapobiega się degradacji mRNA.
Badanie przypadków
Platforma mRNA Yaohai Bio-Pharma opracowała idealny proces reakcji zakonczenia.
Dla mRNA eGFP, pre-produktu mRNA przygotowanego przez enzymatyczne zakapowywanie, po przetransfekcji komórek 293T przez 24 godziny można zaobserwować sygnał fluorescencji eGFP (zielona fluorescencja) na wysokim poziomie, który jest wykrywany za pomocą techniki Western Blot (WB), co dowodzi, że białko docelowe, zintensyfikowany zielony białkowy fluorescent (eGFP), może być efektywnie wyrażane in vitro.
Ekspresja enzymatycznie zakapowanego mRNA eGFP w komórce 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
