W odniesieniu do przygotowywania wsadowego prekursorów RNA, powszechnie stosowaną metodą jest transkrypcja in vitro (IVT). Reakcja IVT używa liniowego DNA plazmidowego zawierającego promotor T7 jako szablonu i syntetyzuje prekursor RNA z nukleozidów trifosforanowych (NTP) jako substratu w obecności polimerazy RNA T7.
Metody cyrkulacji in vitro obejmują ligację chemiczną, enzymatyczną oraz metodę permutowanej introny-eksony (PIE). Ligacja chemiczna i enzymatyczna są odpowiednie do cyrkulacji krótszych RNK. Gdy fragment jest większy niż 100 nt, szybkość cyrkulacji znacząco spada. W przeciwieństwie do tego, metoda bazująca na systemie PIE może osiągnąć cyrkulację sekwencji o długości 8 kb.
W obecności guanozyny trifosforanowej (GTP) struktura PIE ulega cyklowaniu sekwencji ekstraintronowych. W połączeniu z rozsądną strategią zwiększania tempa cyklowania, Yaohai Bio-Pharma może osiągnąć cyklowanie sekwencji o długości do 4 kb, z efektywnością cyklowania przekraczającą 80%.
Reakcja in vitro cyklowania RNA przebiega następująco:
Precursor RNA syntetyczny jest produkowany przez transkrypcję in vitro, a komponent PIE ukończa samospłynianie pod wpływem GTP, tworząc circRNA.
Szczegóły usług
| Proces |
Szczegóły usług |
Okres dostawy (dzień roboczy) |
| Transkrypcja in vitro i cyrkulacja |
Potwierdzenie systemu reakcyjnego |
1-2 |
| Reakcje Transkrypcji in vitro i Cyklizacji |
| Trawienie RNase R |
| Optymalizacja reakcji |
Skład Reakcji, Optymalizacja Czasu |
2-5 |
Nasze cechy
- Swoista konstrukcja i optymalizacja testów
Można osiągnąć cyklicyzację aż do 4 kb RNA.
- Wysoka efektywność cyklicyzacji
Dzięki rozsądnemu podejściu do optymalizacji sekwencji można osiągnąć stopień cyklicyzacji przekraczający 80%.
- Swoisty kontrolowany RNase
Dzięki surowym metodom kontroli RNas w środowisku eksperymentalnym i wyrobach zużywanych, skutecznie zapobiega się degradacji RNA.
Badanie przypadków
Cyklicyzacja i wzbogacanie circRNA in vitro
Na podstawie systemu PIE firma Yaohai Bio-Pharma zoptymalizowała sekwencję circRNA, osiągając stopień cyklicyzacji przekraczający 80% za pomocą elektroforezy w gelu agarowym (AGE). Używając RNase R do wzbogacania circRNA, wyniki elektroforezy E-gel pokazują, że precursor liniowego RNA jest strawiony, a po dalszymoczyszczaniu większość uszkodzonego circRNA może zostać usunięta. Rozwiązanie do oczyszczania zostało opracowane samodzielnie przez Yaohai Bio-Pharma.
Cyrkulacja i wzbogacanie circRNA in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
