Znaczenie testu mocy mRNA
Wraz z szybkim rozwojem szczepionek i leków opartych na mRNA potrzebny jest określony zestaw metod analizy do badania mocy (określenia ich aktywności biologicznej), obejmujący efektywność tłumienia mRNA. Te metody są zwykle oparte na transfekcji komórkowej i funkcjonalnych badaniach białka docelowego.
Yaohai Bio-Pharma oferuje testy mocy oparte na komórkach dla substancji lekowych mRNA lub produktów LNP, w tym transfekcję komórkową (komórki 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 itp.) oraz badania ELISA lub Western Blotting (WB).
Wymagania normative dotyczące testów mocy
Zgodnie z rozważaniami normatywnymi WHO „moc każdego partii ostatecznej szczepionki powinna być określana za pomocą odpowiednio ilościowej i zwalidowanej metody funkcyjnej. Potencjalne badania in vitro dotyczące mocy mogą obejmować układy transfekcji komórkowych lub badania bezkomórkowe”. Natomiast USP zaleciło "badanie oparte na komórkach" do sprawdzenia mocy mRNA, tj. wyrażenie białka docelowego.
Procedura
Krok 1. Transfekcja oparta na komórkach z mRNA lub mRNA-LNP
Komórki są kultywowane i transfekowane mRNA lub mRNA-LNP. Szczegółowo, mRNA jest transfekowane po zmieszaniu z reagentem transfekcji, podczas gdy mRNA-LNP jest bezpośrednio transfekowane do komórek. Po 24-48 godzinach, przezroczystą nadwarstwę zawierającą wyrażone białko odśrodkowuje się.
Krok 2. Badania funkcyjne białka docelowego
Wykonaj analizy ELISA lub WB, aby ocenić funkcjonalne wiązanie białek docelowych.
Badanie przypadków
Badania mocy oparte na komórkach dla próbek mRNA
Yaohai-BioPharma opracowała metodę badań mocy opartą na komórkach dla mRNA, obejmującą kulturę komórkową, transfekcję komórek oraz badania funkcjonalne białek. Transfekowaliśmy mRNA eGFP, mRNA mCherry, mRNA lucyferazy, mRNA białka spike do komórek 293T i wykrywaliśmy białko docelowe za pomocą sygnału fluorescencyjnego, luminescencyjnego lub barwnego, WB, ELISA.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
