Prieš srovę procesų plėtros reikšmė
Prieš srovę vykstantis procesas (USP), taip pat žinomas kaip fermentacijos procesas, yra vienas iš pradinių biologinio apdorojimo etapų. Mikrobų fermentacijos procesas yra labai svarbus didelio tankio ląstelių kultūrai ir egzogeninei genų ekspresijai, kuri tiesiogiai veikia biologinių medžiagų derlių ir kainą.
Ankstyvosiose biologinių vaistų kūrimo stadijose (ikiklinikinėje arba 1/2 fazėje) pagrindinis dėmesys skiriamas keičiamo dydžio be gyvūnų procesų kūrimui su vidutiniu derliumi ir visų produktų kokybės standartų atitikimu.
Vėlesniuose etapuose (3 fazė arba komercinė) daugiausia dėmesio skirsime derlingumui, tvirtumui, mastelio keitimui ir atkuriamumui, kurdami ekonomišką procesą. Veikla, sprendžianti šias problemas, yra procesų apibūdinimo ir proceso patvirtinimo tyrimai. Tuo tarpu paprastai taikomos kokybės pagal dizainą (QbD) ir eksperimentų planavimo (DoE) įrankiai.
Raktiniai žodžiai: proceso kūrimas, optimizavimas ir patvirtinimas, fermentacijos procesas, mikrobų ląstelių fermentacija, bakterijų fermentacija, mielių fermentacija, didelio tankio fermentacija, inžinerinė štamų fermentacija
Taikymas: Biofarmacijos pramonė, žmonių medicina, gyvūnų medicina, vakcina, rekombinantiniai didelės molekulės biologiniai preparatai, rekombinantiniai biologiniai preparatai, biologinis reagentas
Yaohai Bio-Pharma USP sprendimai
Yaohai Bio-Pharma, turinti daugiau nei 10 metų mikrobinės fermentacijos patirties, turi patirties, padedančios išspręsti fermentacijos proceso iššūkius. Galime greitai sukurti didelio tankio fermentacijos strategijas Escherichia coli (E. coli) periplazminė sekrecija, intraląstelinė tirpaus arba inkliuzinio kūno ekspresija ir mielių ekstraląstelinė arba intraląstelinė ekspresija.
Mūsų siūlomos bendrosios fermentacijos kūrimo paslaugos apima:
- Fermentacijos proceso projektavimas atliktas nedideliu 7L mastu tiekimo partijos režimu
- Trijų partijų proceso patvirtinimas 7 l fermentatoriuose
- Tarpinis procesas iki 30L/70L
Mes galime lanksčiai atlikti kelių parametrų optimizavimą, kad pasiektume norimą derlių arba proporciją, naudodami vienkartinį faktorių (OTAF) arba eksperimentų planą (DoE).
Pagrindiniai fermentacijos parametrai yra išvardyti taip:
Fermentacijos terpės be gyvūnų kompozicijos
Be antibiotikų ar ne, inokuliato tūris
Augimo temperatūra, pH, ištirpusio deguonies (DO) lygis
Tiekimo režimas (pvz., tiekimo partija)
Induktoriaus koncentracija (pvz., IPTG, metanolis), indukcijos taškas (ląstelės drėgnas svoris/OD600),
Indukcijos temperatūra, Indukcijos laikas
ir taip toliau
Informacija apie paslaugą
| Paslaugos |
Proceso eiga |
| Auginimas kratymo kolboje (500 ml) |
Terpės paruošimas be gyvūnų → Mikrobų sėklų auginimas → Kultivavimas purtyklėje → Indukcija → Derliaus nuėmimas |
| Auginimas fermentatoriuje (7 l) |
Terpės paruošimas be gyvūnų → Mikrobų sėklų auginimas → Didelio tankio ląstelių fermentacija 7 l bioreaktoriuje → Indukcija → Derliaus nuėmimas |
| Baltymų/peptidų kokybės kontrolė |
Išankstinis apdorojimas tarpląstelinė tirpi ekspresija: mikrobų ląstelių surinkimas ir resuspensija → ultragarsinis smulkinimas → ląstelių nuolaužų pašalinimas → neapdorotas ekstraktas įtraukimo kūno ekspresija: mikrobų ląstelių surinkimas ir pakartotinis suspensija → ultragarsinis smulkinimas → įtraukimo kūno paruošimas → neapdorotas ekstraktas Ekstraląstelinė tirpi ekspresija: kultūros supernatanto rinkimas → koncentracija ir buferis keitimas → Neapdorotas ekstraktas Kokybės analizė Neapdorotas ekstraktas kaip mėginys → Tikslinių baltymų analizė naudojant SDS PAGE arba Western blot metodą (WB) |
| Plazmidžių kokybės kontrolė |
Pirminis apdorojimas ir kokybės analizė Plazmidės ekstrahavimas → DNR analizė agarozės gelio elektroforeze |
Atvejo analizė
Mūsų klientas mums pavedė padidinti tikslinę polipeptidinio hormono išeigą nuo 8 g/l iki 10 g/l.
Remdamiesi visu faktoriniu projektavimu ir atsako paviršiaus dizainu DoE įrankiuose, mes greitai atpažinome ir optimizavome pagrindinius fermentacijos parametrus. Taikant optimizuotą didelio ląstelių tankio fermentacijos procesą, ekspresijos lygis padidėjo iki 10 g/l.
Mūsų patirtys
- Mes dirbome su įvairių tipų mikrobų šeimininkais, pvz. E.coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink padermė 1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) ir Hansenula polymorpha (H. polymorpha).
- Esame patyrę E. coli periplazminė sekrecija, tirpaus ir inkliuzinio kūno ekspresija, taip pat mielių tarpląstelinė ar ekstraląstelinė ekspresija. Inkliuzinio kūno išeiga yra iki 10 g/l, o tirpių baltymų – nuo 0.5 iki 15 g/l.
- Dalyvavome kuriant ir gaminant įvairias dideles molekules, įskaitant rekombinantines subvienetines vakcinas, į virusus panašias daleles (VLP), hormonus (insuliną, GLP-1, augimo hormoną), citokinus (Interleukin-2/IL-2, IL). -15, IL-21), augimo faktoriai (EGF, FGF, NGF), nanokūnai / vieno domeno antikūnai (sdAb), fermentai ir kt.
- įranga
7L*16 fermentacijos sistema
Cedex Bio Analyzer, Bioprocesų analizatorius
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
