Skysčių chromatografija ir masės spektrometrija (LC-MS) pagrįsti peptidų kartografavimo duomenys suteiks daug informacijos apie pirminę ir aukštesnės eilės natūralių ir rekombinantinių baltymų struktūrą, įskaitant aminorūgščių sekos aprėptį, modifikacijas po transliacijos (PTM, pvz., glikozilinimą). , oksidacija, deamidacija), disulfidiniai ryšiai ir kt.
Yaohai Bio-Pharma siūlo jūsų tikslinio baltymo peptidų kartografavimo analizės paslaugas pagal LC-MS, kad pagreitintų baltymų struktūros tyrimus.
Mes dalyvavome įvairių didelių molekulių baltymų struktūriniame apibūdinime, įskaitant rekombinantines subvienetų vakcinas, nanokūnus / VHH / vieno domeno antikūnus (sdAb), antikūnų fragmentus, hormonus / peptidus, citokinus, augimo faktorius (GF), fermentus, ir tt
Peptidų kartografavimo reguliavimo reikalavimai
ICHQ6B gairėse rekomenduojama: „Atrankinis produkto suskaidymas į atskirus peptidus atliekamas naudojant tinkamus fermentus arba chemines medžiagas, o gauti peptidų fragmentai analizuojami HPLC arba kita tinkama analitine procedūra. Peptidų fragmentai turėtų būti kiek įmanoma identifikuojami naudojant tokius metodus kaip aminorūgščių sudėties analizė, N-galo sekos nustatymas arba masės spektrometrija (MS). Veikliosios medžiagos arba vaistinio preparato (DP) peptidų kartografavimas, naudojant tinkamai patvirtintą metodą, yra metodas, dažnai naudojamas norint patvirtinti pageidaujamą produkto struktūrą išleidžiant seriją.
Analizės metodai
| Analizė |
Metodai |
| Peptidų kartografavimas |
Proteazės virškinimas ir skysčių chromatografija-masių spektrometrija (LC-MS) |
Analitinė procedūra
1. Redukcija ir alkilinimas
Tikslas yra sumažinti disulfidinius tiltelius ir blokuoti susidarantį laisvą tiolį. Disulfidinių tiltelių mažinimas padeda atverti baltymų struktūrą, todėl proteolitinis virškinimas tampa efektyvesnis. Šiuo žingsniu taip pat bus nutraukti tiltai tarp grandinių, kai yra kelių grandinių baltymai, kurie turi grandines jungiančius disulfidinius tiltelius (pvz., monokloniniai antikūnai, mAb).
2. Baltymų virškinimas naudojant fermentus
Tikslas yra suskaidyti baltymus į peptidus. Fermentus pasirinkome remdamiesi teorine baltymų seka ir žiniomis apie teorinį baltymo virškinimą fermentais. Pasirinkus fermentus tokiu būdu, turėtų būti gauta geriausia peptidų kartografavimo analizė.
3. Suvirškintų peptidų analizė Internetinės atvirkštinės fazės didelio efektyvumo skysčių chromatografijos naudojimas su ultravioletiniu (UV) ir elektropurškimo masės spektrometriniu aptikimu (LC/ES-MS).
Peptidų atskyrimas pagal poliškumą naudojant LC (atvirkštinės fazės LC)
Peptidui išplaunant iš LC kolonėlės, masės spektrometras generuos informaciją apie masę kartu su fragmento jonų informacija, kuri leidžia mums nustatyti sekos informaciją. Mes naudojame sekos informaciją, kad patvirtintume peptido tapatybę ir pateiktume pirminę informaciją.
Taip pat galime generuoti fragmentacijos informaciją iš peptidų, kai jie patenka į masės spektrometro šaltinį iš LC stulpelio. Priklausomai nuo tyrimo reikalavimų, tai yra selektyvus LC-MS/MS arba neselektyvus, kuris gali būti laikomas tandeminės MS forma.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
