N-glikozilinimo vietos užimtumas yra fiziologinė glikoproteinų savybė ir daugiausia gamina N-glikaną. Yaohai Bio-Pharma N-glikozilinimo vietos užimtumo analizės paslauga atliekama skaidant, išleidžiant, sodrinant ir analizuojant naudojant skysčių chromatografiją-elektropurškimo jonizacijos masių spektrometriją-masių spektrometriją (LC-ESI-MS/MS).
Mes dalyvavome įvairių didelių molekulių baltymų struktūriniame apibūdinime, įskaitant rekombinantines subvienetų vakcinas, nanokūnus / VHH / vieno domeno antikūnus (sdAb), antikūnų fragmentus, hormonus / peptidus, citokinus, augimo faktorius (GF), fermentus, ir tt
N-glikozilinimo vietos užimtumo reguliavimo reikalavimai
Remiantis ICH Q6B gairėmis, „glikoproteinuose nustatomas angliavandenių (neutralių cukrų, amino cukrų ir sialo rūgščių) kiekis. Be to, kuo geriau išanalizuojama angliavandenių grandinių struktūra, oligosacharidų modelis (anteninis profilis) ir polipeptidinės grandinės glikozilinimo vieta (-os).
Analitinis metodas
| Analizė |
Metodai |
| N-glikozilinimo vietos užimtumas |
LC-MS po deglikozilazės ir proteazių virškinimo |
procedūros
1. Baltymų virškinimas baltymais, siekiant sukurti mažus peptidų fragmentus.
2. N-glikano atpalaidavimas naudojant endoglikozidazę H arba PNGazę F. Endoglikozidazė H suardo ryšį tarp dviejų GlcNAc liekanų N-sujungtų glikanų šerdyje, o PNGazė F yra glikoamidazė, nutraukianti ryšį tarp GlcNAc ir Asn, išlaisvindama visą cukraus grandinę ir paverčiant Asn į Asp, masei didėjant 1-Da.
3. N-glikopeptido sodrinimas naudojant HILIC (hidrofilinės sąveikos skysčių chromatografiją)
4. N-susietos glikozilinimo vietos užimtumo analizė naudojant LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
