N-glikanų profiliavimas yra būtinas biofarmacinių preparatų gamybai. „Yaohai Bio-Pharma“ teikia N-glikanų profiliavimo paslaugą, naudodama išsiskiriančių ir paženklintų glikanų skysčių chromatografijos-masių spektrometriją (LC-MS). Bendrieji N-glikanų mėginio paruošimo etapai apima glikoproteino (GP) virškinimą, deglikozilinimą, gryninimą, žymėjimą / darinių sudarymą ir kietosios fazės ekstrahavimą (SPE).
Mes dalyvavome įvairių didelių molekulių baltymų struktūriniame apibūdinime, įskaitant rekombinantines subvienetų vakcinas, nanokūnus / VHH / vieno domeno antikūnus (sdAb), antikūnų fragmentus, hormonus / peptidus, citokinus, augimo faktorius (GF), fermentus, ir tt
N-glikano profiliavimo reguliavimo reikalavimai
Remiantis ICH Q6B gairėmis, „glikoproteinuose nustatomas angliavandenių (neutralių cukrų, amino cukrų ir sialo rūgščių) kiekis. Be to, kiek įmanoma išanalizuojama angliavandenių grandinių struktūra, oligosacharidų modelis (antentinis profilis) ir polipeptidinės grandinės glikozilinimo vieta (-os).
Analitinis metodas
| Analizė |
Metodai |
| N-glikano profiliavimas |
Skysčių chromatografijos-masių spektrometrijos (LC-MS) išsiskyrusių ir žymėtų glikanų analizė |
procedūros
1. Fermentinis glikano atpalaidavimas naudojant peptidą N-glikozidazę F (PNGazė F)
2. Išsiskyrusių glikanų darinys 2-aminobenzamidu (2-AB)
3. Surinktų N-glikanų valymas TSK Amido 80 kolonėlėje, jei yra daug ploviklių, nelakių druskų arba medžiagų su laisvomis amino grupėmis.
4. Ženklinimas fluorescenciniu 2-aminobenzamidu (2-AB)
5. Pažymėtų N-glikanų LC-MS analizė
6. Duomenų analizė
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
