N-glikozacijos vietos užimtumas yra glikoproteinių fiziologinė savybė ir pagrindiniu būdu sukuria N-glikaną. Yaohai Bio-Pharma N-glikozacijos vietos užimtumo analizės paslauga atliekama per traukimą, išleidimą, sumažinimą ir analizę naudojant Skystojo Chromatografinio-Elektrosprito Jonizavimo Masinio Spektrometrijos-Masinio Spektrometrijos (LC-ESI-MS/MS) metodą.
Mes esame įsitraukę į įvairių didelių molekulių, įskaitant rekombinantinius subvieninius vakcinos, nanotiklius/VHHs/ vienvietinius antikūno kūnus (sdAbs), antikūno fragmentus, hormonus/peptidus, citokinus, augimo veiksnius (GF), enzymus, kolagenus ir kt., baltymų struktūrinę charakteristiką.
Reguliacinės reikalavimai dėl N-glikozacijos vietos užimtumo
Pagal ICH Q6B smetinę, „dėl glikoproteinių nustatoma angliavandenių turinys (neutralieji šešėliai, aminio šešėliai ir sialinio rūgštis). Be to, analizuojama angliavandenio grandinės struktūra, oligošešėlių šablonas (antenos profilis) ir polipeptido grandinės glukozavimo vietos kaip galima labiau.“
Analizinis metodas
| Analizė |
Metodai |
| N-glikoziacinio vietos užimtumas |
LC-MS po deglikozidazo ir proteazos sužavinimo |
Procedūros
1. Baitinių sužavinimas į mažus peptidinius fragmentus.
2. N-glikano išlaisvinimas naudojant endoglikozidazą H arba PNGazą F. Endoglikozidazas H atkerta ryšį tarp dviejų GlcNAc dalelių branduolyje susietuose N-glikanuose, o PNGazas F yra glikoamidazas, kuris atkerta ryšį tarp GlcNAc ir Asn, išlaisvinantis visą angliavandenio grandinę ir konvertuojantis Asn į Asp su masės padidėjimu 1-Da.
3. N-glikopeptido apgaubimas per HILIC (hidrofilinis skilimo dujinis chromatografija)
4. N-susietų glukozavimo vietų užimtumo analizė naudojant LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
