Sintesi su misura di saRNA
L'mRNA autoricostituente (saRNA), noto anche come RNA replicone, codifica sequenze di mRNA trascritte in vitro (IVT) e geni replicasi virali derivati da alphavirus o flavivirus. I geni della replicasi virale consentono l'autoricostituzione dell'mRNA, il che porta a un aumento dell'espressione proteica e a una dose minima di RNA richiesta rispetto agli mRNA non amplificanti. Un altro aspetto è che lo saRNA è una molecola relativamente grande (più di 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma ha sviluppato un insieme di tecnologie per la sintesi di mRNA per fornire mRNA non amplificante e mRNA autoricostituente (1000 nt~14000 nt), come progettazione e ottimizzazione delle sequenze, IVT, purificazione, liofilizzazione e incapsulamento in nanoparticelle lipidiche (LNP). Tutti i prodotti vengono rilasciati secondo standard rigorosi di controllo qualità.
Fig.1 Caratteristiche strutturali degli mRNA trascritti in vitro: convenzionale, circolare e autoricostituente.
Caratteristiche delle sequenze dell'mRNA autoricostituente
L'RNA autoricostituente comprende quattro proteine non strutturali (denominate nsP1, nsP2, nsP3 e nsP4), che derivano dagli alphavirus, in particolare dal virus dell'encefalite equina venezuelana (VEEV). Tra queste, nsP1 mostra attività enzimatiche duali, ovvero GTasi e N7MTasi, mentre nsP2 possiede attività RTPasi, fondamentale per il cappatura del mRNA IVT per generare la struttura Cap 0. Inoltre, nsP2 agisce come proteasi e elicasa, facilitando l'elaborazione complessa di tutto il complesso nsP. La funzione precisa di nsP3 rimane ancora poco chiara, tuttavia essa interagisce con diverse proteine cellulari dell'ospite, contribuendo all'attenuazione della risposta antivirale attivata dall'ospite.
Una regione promotore subgenomica degli alphavirus (SGP) è posizionata prima del gene di interesse (GOI). L'elemento SGP favorisce l'inizio della trascrizione del GOI saltando la lettura della sequenza che codifica le proteine nsP virali.
Fig.2 Sintesi e test cellulari dell'eGFP saRNA della piattaforma RNASci di Yaohai Bio-Pharma.
Soluzioni personalizzate di saRNA
Il protocollo di sintesi di saRNA è simile a quello di mRNA: Sintesi personalizzata di mRNA
- Progettazione della sequenza
- Preparazione del template plasmidico
- trascrizione in vitro (IVT)
- chiusura enzimatica di mRNA
- chiusura co-trascrizionale di mRNA
- purificazione di mRNA
- liofilizzazione di mRNA
- Incapsulamento LNP
- Analisi e Test
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