Dans le processus de préparation de l'ARNm de transcription in vitro (IVT), un ADN plasmidique linéarisé est requis comme modèle de transcription pour l'IVT à l'aide de l'ARN polymérase T7. Un ADN plasmidique de haute qualité est crucial pour la transcription in vitro.
Basé sur la plate-forme de service de préparation de plasmides mature, Yaohai Bio-Pharma peut offrir un service de préparation d'ADN plasmidique linéarisé de haute pureté et de haut niveau pour obtenir une transcription IVT efficace.
Détails des services
| Processus | Service en option | Détails du service | Délai de livraison (jour ouvrable) |
| Préparation de plasmide circulaire | Synthèse des gènes | Synthèse de gènes (tiers) | 7-10 |
| Amplification plasmidique | Amplification plasmidique | 2 |
| Extraction de plasmide |
| Préparation de plasmide linéarisé | Linéarisation et purification des plasmides | Linéarisation plasmidique | 1 |
| Purification de l'ADN par linéarisation |
| Contrôle qualité de l'ADN plasmidique | Pureté concentrée | Spectrophotométrie ultraviolette (UV) | 1-2 |
| Conformation plasmidique | Électrophorèse sur gel d'agarose (AGE) |
| Électrophorèse capillaire (CE)-facultatif |
| Identification du plasmide | Identification des enzymes de restriction/AGE |
Nos offres
Sélection flexible de méthodes de linéarisation
- Taux de récupération élevé
Optimisation des méthodes d’extraction et de purification de l’ADN pour atteindre des taux de récupération élevés.
- Contrôle de qualité rigoureux
Normes strictes de contrôle des processus, avec un taux de conformation superhélicoïdale des échantillons de plasmides pour la recherche de plus de 80 %.
- Processus de plateforme mature
Services de préparation et de contrôle qualité de plasmides de haut niveau et à haute efficacité pour répondre aux besoins expérimentaux.
Étude de cas
En prenant comme exemple le produit mRNA_luciférase du catalogue Yaohai Bio-Pharma, l'échantillon de plasmide modèle de transcription (qualité recherche) a un rapport superhélicoïdal de plus de 90 %, un taux de linéarisation proche de 100 % et un taux de transcription ultérieur allant jusqu'à 1 : 200 ( ADN plasmidique linéarisé : ARNm).
L'ARNm_luciférase obtenue grâce à la préparation d'un plasmide linéarisé comme matrice est transfectée dans des cellules 293T et l'activité de réaction enzyme-substrat est évaluée 24 h après la transfection.
Un signal d'activité luciférase fort et évident peut être détecté, c'est-à-dire que la protéine luciférase est exprimée efficacement, ce qui suggère que la pureté du modèle de transcription peut pleinement satisfaire aux exigences d'une préparation d'ARNm de haute qualité.
Test du rapport des plasmides superenroulés
Validation de l'expression de l'ARNm de la luciférase in vitro
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