La préparation de CircRNA nécessite un ARN linéaire comme matériau précurseur (précurseur d'ARN) pour la cyclisation, où le précurseur d'ARN est généralement préparé en utilisant de l'ADN plasmidique linéarisé comme modèle de transcription et transcrit in vitro à l'aide de l'ARN polymérase T7.
Un ADN plasmidique de haute qualité est essentiel pour la transcription in vitro (IVT). Basé sur la plate-forme de service de préparation de plasmides mature, Yaohai Bio-Pharma peut fournir un service de préparation d'ADN plasmidique linéarisé (ADNp) standard et de haute pureté pour garantir l'intégrité des produits IVT.
Détails des services
| Processus | Service en option | Détails du service | Délai de livraison (jour ouvrable) |
| Préparation de plasmide circulaire | Synthèse des gènes | Synthèse de gènes (tiers) | 7-10 |
| Amplification plasmidique | Amplification plasmidique | 2 |
| Extraction de plasmide |
| Préparation de plasmide linéarisé | Linéarisation et purification des plasmides | Linéarisation plasmidique | 1 |
| Purification de l'ADN par linéarisation |
| Contrôle qualité de l'ADN plasmidique | Pureté concentrée | Spectrophotométrie ultraviolette (UV) | 1-2 |
| Conformation plasmidique | Électrophorèse sur gel d'agarose (AGE) |
| Électrophorèse capillaire (CE)-facultatif |
| Identification du plasmide | Identification des enzymes de restriction/AGE |
Nos offres
Sélection flexible de méthodes de linéarisation
- Taux de récupération élevé
Optimisation des méthodes d’extraction et de purification de l’ADN pour atteindre des taux de récupération élevés.
- Contrôle de qualité rigoureux
Normes strictes de contrôle des processus, avec un taux de conformation superhélicoïdale des échantillons de plasmides pour la recherche de plus de 80 %.
- Processus de plateforme mature
Services de préparation et de contrôle qualité de plasmides de haut niveau et à haute efficacité pour répondre aux besoins expérimentaux.
Étude de cas
En prenant comme exemple le produit mCherry circRNA de Yaohai Bio-Pharma, le taux de super-enroulement des échantillons de plasmides modèles de transcription (qualité recherche) est supérieur à 70 %, avec un taux de linéarisation proche de 100 %.
Le circRNA mCherry est préparé avec un plasmide linéarisé comme modèle et transfecté dans des cellules 293T. Un niveau élevé d'expression de fluorescence (fluorescence rouge) est détecté après 24 heures de transfection, qui sera amélioré après 48 heures, et peut encore être détecté le 7ème jour et le 14ème jour après la transfection.
La protéine mCherry est exprimée de manière stable et efficace, et la pureté du modèle transcriptionnel peut répondre aux exigences d'un produit médicamenteux circRNA (DP) de haute qualité.
Validation de l'expression in vitro du circRNA mCherry
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