Concernant la production massive d’ARNm, la transcription in vitro (IVT) est une méthode plus efficace et plus mature. La réaction IVT adopte un ADN plasmidique linéarisé contenant le promoteur T7 comme matrice, et l'ARNm est synthétisé avec des nucléoside triphosphates (NTP) comme substrats en présence d'ARN polymérase T7.
La modification nucléotidique constitue une avancée majeure dans l'exploration de l'ARNm, où les molécules d'ARNm non modifiées sont reconnues par des capteurs d'ARN intracellulaires pour activer l'immunité innée. Pour des considérations sur l'immunogénicité et l'efficacité de la traduction de l'ARNm in vivo, le processus IVT utilise généralement certains types de NTP modifiés, et les nucléotides modifiés courants sont la pseudouridine (Ψ), la N1-méthyl-pseudouridine (N1Ψ) et la 5-méthylcytosine (5mC).
Processus de transcription in vitro de l'ARNm
Diagramme de réaction de transcription in vitro (IVT)
Détails des services
Service en option | Détails du service | Délai de livraison (jour ouvrable) |
Transcription in vitro (IVT) | IVT, Transcription in vitro | 1 |
| Modifications nucléotidiques (Ψ/N1Ψ/5mC, etc.) |
| Suppression de la matrice d'ADN (DNase I) |
Optimisation des conditions IVT - en option | Conception et optimisation des composants de réaction IVT | 2-5 |
Nos offres
- Stratégies diversifiées de modification des nucléotides
Améliorer la stabilité de l’ARNm et l’expression des protéines in vivo.
- Conception et optimisation rigoureuses des tests
La préparation de fragments d’ARNm jusqu’à 10 Ko peut être réalisée.
En optimisant les conditions de réaction IVT, le taux de transcription peut atteindre 1 : 200.
- Contrôle strict de la RNase
Un contrôle strict de la RNase via un environnement expérimental et des consommables peut prévenir efficacement la dégradation de l’ARNm.
Étude de cas
Le système de réaction IVT actuel est approximativement optimisé pour les systèmes synthétiques d’une longueur d’environ 100 nt, et non pour les ARNm de longueur arbitraire. Plus la séquence d’ARNm est longue, plus elle est difficile à transcrire et plus elle est sujette à la dégradation.
Afin de préparer des séquences d'ARNm personnalisées d'une longueur d'environ 10 kb, Yaohai Bio-Pharma a préparé avec succès des échantillons de haute qualité avec un taux de transcription élevé de 1:135 et a obtenu 135 µg de produits d'ARNm initialement purifiés après 1 µg de plasmide linéarisé. a été transcrit in vitro grâce à un plan expérimental rigoureux, une optimisation continue des conditions de réaction et un contrôle strict de la RNase.
Identification de l'ARNm (électrophorèse sur gel d'agarose)
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