Concernant la préparation par lots de précurseurs d’ARN, une méthode couramment utilisée est la transcription in vitro (IVT). La réaction IVT utilise un ADN plasmidique linéarisé contenant le promoteur T7 comme matrice et synthétise un précurseur d'ARN avec des nucléoside triphosphates (NTP) comme substrat en présence d'ARN polymérase T7.
Les méthodes de cyclisation in vitro comprennent la ligature chimique, la ligature enzymatique et la méthode intron-exon permuté (PIE). La ligature chimique et la ligature enzymatique conviennent à la cyclisation d'ARN plus courts. Lorsque le fragment est supérieur à 100 nt, le taux de cyclisation diminue considérablement. En revanche, la méthode nucléase basée sur le système PIE permet de réaliser la cyclisation de séquences de 8 kb.
Sous la catalyse du guanosine triphosphate (GTP), la structure PIE subit une cyclisation de séquences extra-intron. Combiné à une stratégie raisonnable pour augmenter le taux de cyclisation, Yaohai Bio-Pharma peut réaliser une cyclisation de séquences allant jusqu'à 4 kb, avec une efficacité de cyclisation de plus de 80 %.
La réaction de cyclisation in vitro de l'ARN se déroule comme suit :
Le précurseur de l'ARN est synthétisé par transcription in vitro et le composant PIE achève son auto-épissage sous la catalyse du GTP pour former le circARN.
Détails des services
| Processus | Détails du service | Délai de livraison (jour ouvrable) |
| Transcription et circulation in vitro | Confirmation du système de réaction | 1-2 |
| Réactions de transcription et de cyclisation in vitro |
| Digestion de la RNase R |
| Optimisation des réactions | Composition de la réaction, optimisation du temps | 2-5 |
Nos offres
- Conception et optimisation rigoureuses des tests
Jusqu'à 4 kb de cyclisation d'ARN peuvent être obtenus.
- Haute efficacité de cyclisation
Un taux de cyclisation supérieur à 80 % peut être atteint grâce à une stratégie rationnelle d’optimisation des séquences.
- Contrôle strict de la RNase
Grâce à un contrôle strict des RNases dans l’environnement expérimental et des consommables, la dégradation de l’ARN est efficacement évitée.
Étude de cas
Cyclisation in vitro et enrichissement du circRNA
Basé sur le système PIE, Yaohai Bio-Pharma a optimisé la séquence des circRNA, avec un taux de cyclisation de plus de 80 % par électrophorèse sur gel d'agarose (AGE). En utilisant la RNase R pour enrichir le circARN, les résultats de l'électrophorèse sur gel E montrent que le précurseur de l'ARN linéaire est digéré et qu'après une purification plus poussée, la plupart des circARN coupés peuvent être éliminés. La solution de purification est auto-développée par Yaohai Bio-Pharma.
Circulation in vitro et enrichissement en circARN
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