Tests de puissance basés sur les cellules
L’importance du test de puissance de l’ARNm
Avec le développement rapide des vaccins et des produits thérapeutiques à ARNm, un panel spécifique de méthodes d’analyse est nécessaire pour tester la puissance (définissant leur activité biologique), impliquant l’efficacité traductionnelle de l’ARNm. Ces méthodes sont généralement basées sur la transfection cellulaire et des analyses fonctionnelles de la protéine cible.
Yaohai Bio-Pharma propose des tests d'activité basés sur les cellules pour les substances médicamenteuses à ARNm ou les produits LNP, y compris la transfection cellulaire (cellules 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, etc.) et les tests ELISA ou Western Blotting (WB).
Exigences réglementaires pour les tests d'activité
Selon les considérations réglementaires de l’OMS, « l’activité de chaque lot du vaccin final doit être déterminée à l’aide d’une ou plusieurs méthodes fonctionnelles suffisamment quantitatives et validées. Les tests d’activité in vitro potentiels peuvent inclure des systèmes de transfection cellulaire ou des tests acellulaires. Et l'USP a recommandé un « test cellulaire » pour tester la puissance de l'ARNm, c'est-à-dire l'expression de la protéine cible.
Méthode analytique
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Analyse
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Méthodologie
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Essais de puissance
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La transfection cellulaire et la protéine cible identifient :
Cellules 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, etc.
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Procédure
Étape 1. Transfection cellulaire avec ARNm ou ARNm-LNP
Les cellules sont cultivées et transfectées avec de l'ARNm ou de l'ARNm-LNP. En détail, l’ARNm est transfecté après avoir été mélangé à un réactif de transfection, tandis que l’ARNm-LNP est directement transfecté dans les cellules. Après 24 à 48 heures, clarifier le surnageant contenant la protéine exprimée par centrifugation.
Étape 2. Tests fonctionnels de la protéine cible
Effectuez des tests ELISA ou WB pour évaluer la liaison fonctionnelle des protéines cibles.
Étude de cas
Tests de puissance cellulaires d'échantillons d'ARNm
Yaohai-BioPharma a développé une méthode de test d'activité basée sur les cellules pour l'ARNm, impliquant la culture cellulaire, la transfection cellulaire et les tests fonctionnels des protéines. Nous avons transfecté l'ARNm de l'eGFP, l'ARNm de mCherry, l'ARNm de la luciférase, l'ARNm de la protéine de pointe dans des cellules 293T et détecté la protéine cible par fluorescence, signal luminescent ou coloré, WB, ELISA.
Tests de puissance cellulaire des produits à ARNm par Yaohai Bio-Pharma
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