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conception de séquence d'ARNm

conception de séquence d'ARNm

Selon le dogme central, l'ARN messager (ARNm) est le pont pour la transmission du matériel génétique de l'ADN aux protéines.

l'ARNm joue un rôle biologique en codant des protéines in vivo, et l'ARNm mature chez les organismes eucaryotes se compose de cinq composants : le 5' Cap (structure cap), le 5' UTR (région non codante), l'ORF (cadre de lecture ouvert), le 3' UTR, et la queue 3' polyA (queue polyadénylée).

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conception et optimisation de la séquence d'ARNm Conception et optimisation des séquences codantes

Alignement de la séquence CDS

Optimisation des codons CDS

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Conception et optimisation des séquences non codantes

conception et optimisation de la séquence du 5' UTR

conception et optimisation de la séquence du 3' UTR

conception et optimisation de la séquence polyA

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Options personnalisables
5’ UTR/3’ UTR
  • Séquence UTR naturelle
  • Séquence UTR mutante/ingénierie
queue polyA 3'
  • queue de 100A ~120A (recommandée)
  • Queue polyA segmentée
  • Autre queue personnalisée
Stratégies courantes pour la conception de séquences d'ARNm
composants de l'ARNm Fonctions biologiques Stratégies d'optimisation
chapeau 5’ Protéger l'ARNm de la dégradation par les exonucléases et agir en synergie avec la queue polyA à l'extrémité 3', la protéine de liaison polyA et le facteur d'initiation de traduction pour initier la traduction des protéines. La structure naturelle du Cap1 évite les récepteurs de reconnaissance de motifs et réduit ainsi la réponse immunitaire naturelle, ce qui peut être réalisé par un chapeautage co-transcriptionnel en une étape ou un chapeautage enzymatique en deux étapes [voir chapeautage enzymatique de l'ARNm et chapeautage co-transcriptionnel pour plus de détails].
région non codante 5' La région non codante 5' peut être reconnue par les ribosomes, réguler la traduction de l'ARNm et affecter la stabilité de l'ARNm. Contient des séquences Kozak sans structure secondaire très stable. Les UTR naturels des gènes hautement exprimés sont préférés pour la transcription in vitro (TIV) des ARNm, tels que l'α-globine et la β-globine.
CDS Régions codantes de protéines et séquences codantes pour les antigènes, anticorps ou autres protéines fonctionnelles. L'optimisation des codons augmente le niveau de traduction, en notant que certains codons non optimaux peuvent jouer un rôle dans le pliement des protéines.
3' UTR Régulent la traduction de l'ARNm et sa stabilité. Les UTR naturels des gènes hautement exprimés sont préférés pour les ARNm synthétisés in vitro, tels que ceux de l'α-globine et de la β-globine.
queue polyA 3' Régulent l'expression des protéines et protègent la structure du cap contre la dégradation. Une longueur adéquate (100-150 paires de bases) est requise ; l'encodage de la queue polyA sur le plasmide modèle de transcription assure une longueur de queue polyA plus définie.
Nos fonctionnalités
  • Sélection diversifiée de sources UTR

Sources multiples de bibliothèques naturelles et modifiées d'UTR hautement exprimées ; stratégie de modification mature des UTR.

  • Équipe d'optimisation CDS de pointe

Collabore avec une équipe d'algorithmes IA professionnelle pour terminer l'optimisation des codons.

  • Distribution uniforme de la queue polyA

Ajoute des séquences polyA selon les modèles d'ADN pour contrôler plus précisément la longueur de l'ARNm.

  • Combinaisons d'optimisation diversifiées

Réalise une expression efficace d'ARNm à faible immunogénicité.

Étude de cas

Conception de séquence d'un ARNm à double rapporteur : ARNm mCherry-eGFP

Le service d'ARNm de Yaohai Bio-Pharma continue d'être amélioré grâce à la conception et à l'optimisation d'une séquence en tandem de gènes à double rapporteur, qui permet la co-expression de deux gènes.

En utilisant un réagent de transfection conventionnel, la séquence en tandem de double gène mCherry-eGFP ARNm est transférée dans les cellules 293T, et deux signaux fluorescents de mCherry (rouge) et de protéine fluorescente verte renforcée (eGFP) sont détectés avec une expression simultanée après 48 heures, et le graphique superposé est mis en évidence en jaune.

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Expression de l'ARNm mCherry-eGFP dans les cellules 293T

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