le calottage en 5' est une modification essentielle de l'ARNm. Les ARNm avec des structures de cap, en particulier les structures Cap1, aident les ARNm à échapper aux réponses immunitaires innées in vivo, ce qui favorise la traduction efficace des protéines.
Le calottage enzymatique (méthode en deux étapes) est la méthode conventionnelle de calottage de l'ARNm, similaire au processus de calottage chez les organismes eucaryotes. Sous l'action d'une série d'enzymes, le 7-méthylguanosine (m7G) est lié à l'extrémité 5' de l'ARNm par un lien triphosphate 5'-5' et subit une modification de méthylation pour former la structure de cap Cap 1 (m7GpppN).
Schéma de formation de la structure de cap naturelle
Le flux de réaction de calottage enzymatique est le suivant :
Un ADN plasmidique linéarisé est utilisé comme modèle pour la transcription in vitro (TIV) en présence de la polymérase T7, et un ARNm avec une structure de cap en 5' est formé après une purification en une étape utilisant l'enzyme de calottage de la variole et la 2'-O-méthyltransférase.
Détails des Services
Service optionnel |
Détails du service |
Période de livraison (Jour) |
cappage enzymatique de l'ARNm |
Réaction de capping enzymatique |
1 |
Optimisation de la réaction de capping - optionnel |
Conception et optimisation des composants de la réaction |
3~7 |
Nos fonctionnalités
- Conception et optimisation du composant de la réaction de capping
Le composant de la réaction de capping est optimisé, et la production du transcript d'ARNm est considérablement augmentée.
- Vérification de l'expression in vitro
L'ARNm cappé est transfecté dans les cellules 293T, et l'expression de la protéine cible peut être détectée.
- Contrôle strict de la RNase
Grâce à un contrôle rigoureux des RNases dans l'environnement expérimental et des consommables, la dégradation de l'ARNm est efficacement prévenue.
Étude de cas
La plateforme d'ARNm de Yaohai Bio-Pharma a développé un processus de réaction de capping parfait.
Pour l'ARNm eGFP, un pré-produit d'ARNm préparé par capping enzymatique, un signal de fluorescence eGFP (fluorescence verte) à un niveau élevé peut être observé après la transfection des cellules 293T pendant 24 heures, ce qui est détecté par Western Blot (WB), démontrant que la protéine cible, la protéine fluorescente verte renforcée (eGFP), peut être exprimée efficacement in vitro.
Expression de l'ARNm eGFP Cappé Enzymatiquement dans les Cellules 293T
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