En ce qui concerne la production massive de l'ARNm, la transcription in vitro (IVT) est une méthode plus efficace et mature. La réaction IVT utilise un plasmide d'ADN linéarisé contenant le promoteur T7 comme modèle, et l'ARNm est synthétisé avec des triphosphates de nucléosides (NTPs) comme substrats en présence de la polymérase RNA T7.
La modification des nucléotides représente une percée dans l'exploration de l'ARNm, où les molécules d'ARNm non modifiées sont reconnues par les capteurs d'ARN intracellulaires pour activer l'immunité innée. Pour des considérations liées à l'immunogénicité in vivo de l'ARNm et à l'efficacité de traduction, le processus IVT utilise généralement certains types de NTPs modifiés, et les nucléotides modifiés courants sont l'uridine pseudouridique (Ψ), la pseudouridine N1-méthyl (N1Ψ) et la cytosine 5-méthyl (5mC).
Processus de transcription in vitro de l'ARNm
Schéma de la réaction de transcription in vitro (IVT)
Détails des Services
Service optionnel |
Détails du service |
Période de livraison (jour ouvrable) |
transcription in vitro (IVT) |
IVT, Transcription in vitro |
1 |
| Modifications des nucléotides (Ψ/N1Ψ/5mC, etc.) |
| Élimination du modèle d'ADN (DNase I) |
Optimisation des conditions d'IVT - optionnel |
Conception et optimisation des composants de la réaction d'IVT |
2-5 |
Nos fonctionnalités
- Stratégies Diversifiées de Modification des Nucléotides
Améliore la stabilité de l'ARNm et l'expression protéique in vivo.
- Conception Rigoureuse des Tests et Optimisation
La préparation de fragments d'ARNm jusqu'à 10kb peut être réalisée.
En optimisant les conditions de réaction IVT, le taux de transcription atteint jusqu'à 1:200.
- Contrôle strict de la RNase
Un contrôle strict de la RNase grâce à un environnement expérimental et à des consommables peut prévenir efficacement la dégradation de l'ARNm.
Étude de cas
Le système de réaction IVT actuel est approximativement optimisé pour des systèmes synthétiques d'une longueur d'environ 100 nt, pas pour des ARNm de longueur arbitraire. Plus la séquence d'ARNm est longue, plus il est difficile de la transcrire et plus elle est sujette à la dégradation.
Afin de préparer des séquences d'ARNm personnalisées d'une longueur d'environ 10 kb, Yaohai Bio-Pharma a réussi à préparer des échantillons de haute qualité avec un taux de transcription élevé de 1:135 et a obtenu 135 μg de produits d'ARNm initialement purifiés après que 1 μg de plasmide linéarisé ait été transcrit in vitro grâce à une conception expérimentale rigoureuse, à une optimisation continue des conditions de réaction et à un contrôle strict de la RNase.
Identification de l'ARNm (Électrophorèse sur gel d'agarose)
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