Yaohai Bio-Pharma prépare le circRNA sur la base du système PIE (alignement des exons et introns), qui repose sur la fonction d'autosplicing des introns de type I pour réaliser la cyclisation de l'ARN. La structure PIE est conçue à l'aide du gène T4 td ou du gène précurseur tRNA poisson, et l'organisation est la suivante :
L'intron ARN et le fragment d'exon support sont divisés en deux parties (extrémité 5' et extrémité 3'), où la séquence d'extrémité 5' est transférée à la queue de la séquence cible, la séquence d'extrémité 3' est insérée devant la séquence cible, et la séquence du gène cible est insérée au milieu.
Sous la catalyse du GTP, la structure PIE entraîne la cyclisation de séquences autres que les introns. Associée à une stratégie d'amélioration raisonnable du taux de cyclisation, Yaohai Bio-Pharma peut atteindre une cyclisation de séquences jusqu'à 4 kb avec un taux de cyclisation supérieur à 80 %.
Figure 1. Cyclisation in vitro des circARN basée sur le système PIE
Détails des Services
| Process |
Service optionnel |
Détails du service |
Période de livraison (jour ouvrable) |
| conception et optimisation de la séquence circRNA |
Conception et optimisation des séquences codantes |
Alignement de la séquence CDS
Optimisation des codons CDS
|
1 |
| Conception et optimisation des séquences non codantes |
Conception et optimisation des séquences d'introns et d'exons
Conception et optimisation de la séquence du bras homologue
Conception et optimisation de la séquence d'espacement
|
1-2 |
Stratégies courantes pour la conception de séquences d'ARNm
| Composants de l'ARN circulaire |
Fonctions biologiques |
Stratégies d'optimisation |
| Séquences d'introns et d'exons à deux terminaux |
Autosplicing intron catalysé par le GTP pour la cyclisation des séquences en dehors de l'intron. |
Conçu selon le gène T4 td ou le gène précurseur de tRNA de l'huile de poisson. |
| Codage |
IRES |
Site de reconnaissance interne de la ribosome qui régule la traduction de l'ARN circulaire. |
Écran de séquences de site d'entrée interne du ribosome (IRES) provenant de différentes sources virales, par exemple EMCV, sources CVB3. |
| CDS |
Régions codantes de protéines, séquences codant pour des antigènes, des anticorps ou d'autres protéines fonctionnelles. |
L'optimisation des codons augmente le niveau de traduction ; certains codons non optimaux peuvent jouer un rôle dans le pliement des protéines. |
| Non codant |
Séquences non codantes |
Cibler les miARN ou les protéines pour exercer une régulation génique ou protéique. |
Le ciblage de sites de liaison spécifiques pour les miARN ou les protéines peut répéter les séquences du site de liaison. |
Nos fonctionnalités
- Système de Cyclisation PIE Optimisé combiné avec des stratégies d'optimisation raisonnables pour atteindre un taux de cyclisation supérieur à 80 % ;
- Collaboration avec l'Équipe de Pointe en Optimisation CDS et une équipe d'algorithmes IA professionnels pour optimiser les codons de la région CDS ;
- Un processus circRNA mature et parfait peut être obtenu avec une efficacité de cyclisation élevée, une stabilité élevée et une efficacité de traduction élevée.
Étude de cas
Yaohai Bio-Pharma a lancé le produit de contrôle protéine fluorescente verte renforcée (eGFP) circRNA, qui repose sur le système PIE pour réaliser la cyclisation de l'ARN.
En utilisant un réagent de transfection conventionnel, l'eGFP circRNA est transféré dans les cellules 293T, et un signal fluorescent eGFP (vert) peut être détecté après 24h, qui sera amplifié après 48h. Le signal fluorescent peut encore être détecté le 7ème jour et le 14ème jour après la transfection.
Validation de l'expression in vitro de l'eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
