Essais de puissance à base de cellules
L'importance de l'essai de puissance d'ARNm
Avec le développement rapide des vaccins et traitements à base d'ARNm, un panel spécifique de méthodes d'analyse est nécessaire pour tester la puissance (définissant leur activité biologique), impliquant l'efficacité de traduction de l'ARNm. Ces méthodes sont généralement basées sur la transfection cellulaire et les essais fonctionnels de la protéine cible.
Yaohai Bio-Pharma propose des essais de puissance à base de cellules pour les substances médicamenteuses d'ARNm ou les produits LNP, y compris la transfection cellulaire (cellules 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, etc.) et les essais ELISA ou Western Blotting (WB).
Exigences réglementaires pour les essais de puissance
Selon les considérations réglementaires de l'OMS, « La puissance de chaque lot du vaccin final doit être déterminée à l'aide d'une méthode fonctionnelle quantitative et validée appropriée. Les essais de puissance in vitro potentiels peuvent inclure des systèmes de transfection cellulaire ou des essais sans cellules. » Et la Pharmacopée américaine (USP) a recommandé un « essai cellulaire » pour tester la puissance de l'ARNm, c'est-à-dire l'expression du protéine cible.
Méthode analytique
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Analyse
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Méthodes
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Essais de puissance
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Transfection cellulaire et identification de la protéine cible :
cellules 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, etc.
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Procédure
Étape 1. Transfection cellulaire avec ARNm ou ARNm-LNP
Les cellules sont cultivées et transfectées avec de l'ARNm ou de l'ARNm-LNP. Plus précisément, l'ARNm est transfecté après avoir été mélangé avec un réactif de transfection, tandis que l'ARNm-LNP est directement transfecté dans les cellules. Après 24 à 48 heures, clarifiez le surnageant contenant la protéine exprimée par centrifugation.
Étape 2. Essais fonctionnels de la protéine cible
Effectuez des tests ELISA ou WB pour évaluer la liaison fonctionnelle des protéines cibles.
Étude de cas
Tests de Potence à Base de Cellules sur les Échantillons d'ARNm
Yaohai-BioPharma a développé une méthode de test de potence à base de cellules pour l'ARNm, impliquant la culture cellulaire, la transfection cellulaire et les tests fonctionnels de protéines. Nous avons transféré l'ARNm eGFP, l'ARNm mCherry, l'ARNm luciferasé, l'ARNm de la protéine Spike dans les cellules 293T, et détecté la protéine cible par le biais de signaux fluorescents, luminescents ou colorés, ainsi que par WB et ELISA.
Tests de Potence à Base de Cellules sur les Produits d'ARNm par Yaohai Bio-Pharma
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