Virtauskromatografia-massaspektrometria (LC-MS) perustuva peptidi-karttausdata tarjoaa runsaasti tietoa alkuperäisestä ja korkeamman kertaluvun rakenneista sekä luonnollisista että rekombinanttisista proteiineista, mukaan lukien aminohappojonojen peite, post-transkriptionaaliset muunnokset (PTMs, esim. sokeristuminen, oksidointi, deamidointi), disulfidipitoimet jne.
Yaohai Bio-Pharma tarjoaa peptidi-karttausanalyysipalveluita kohdeproteiinisi LC-MS:llä nopeuttaaksesi tutkimusta proteiinirakenteesta.
Olemme olleet mukana erilaisten suurten molekyylien proteiinirakenteen karakterisoinnissa, mukaan lukien rekombinantit alijakot rokotteet, Nanokroppien/VHHt/Single-domain Antibodies (sdAbs), Antibody Fragments, Hormonit/Peptidit, Sytokiinit, Kasvuhormonit (GF), Enzymit, Kollagenaat jne.
Sääntelyvaatimukset peptidi-karttaukselle
ICHQ6B -ohje suosittelee: ”Valitseva hajoittelu tuotteeksi erillisiin peptidiin suoritetaan sopivien enzyymien tai kemikaalien avulla, ja saadut peptidi-fragmentit analysoidaan HPLC:llä tai muulla soveltuvalla analyysimenetelmällä. Peptidi-fragmentit tulisi tunnistaa niin pitkälle kuin mahdollista käyttämällä tekniikoita, kuten aminohappokompositioanalyysiä, N-loppusekvenssointia tai massaspectrometriaa (MS). Aktiivisen aineen tai lääkevalmisteiden (DP) peptidikarttaus validoidun menetelmän avulla on usein menetelmä, jota käytetään toivottua tuotteen rakennetta varten varmistamaan sarjan vapauttaminen.”
Analyttiset menetelmät
| Analyysi |
Menetelmät |
| Peptidikartta |
Protaasi-hajoittelu ja nestemerkkuskromatografia-massaspectrometria (LC-MS) |
Analyysimenetelmä
1. Reduktiot ja alkylaatiot
Tarkoituksena on vähentää disulfidipuolia ja estää niiden vapaa tiosyde. Disulfidipuolien vähentäminen auttaa avaamaan proteiinin rakennetta, mikä tekee proteolyttisen hajoamisen tehokkaammaksi. Tämä vaihe myös katkaisee ketjujen väliset puolisovincit moniketjusten proteiinien tapauksessa, jotka sisältävät disulfidipuolia ketjuiden välillä (esim. monoklonaalit抗体t, mAbs).
2. Proteiinin hajoaminen enzyymillä
Tarkoituksena on hajottaa proteiini peptideiksi. Valitsimme enzyymit perustuen proteiinin teoreettiseen sekvenssiin ja tiedostamme siitä, miten enzyymit hajoavat proteiinia teoreettisesti. Tällä tavalla valitsemalla enzyymeja tulisi saada paras peptidikartta-analyysi.
3. Hajoamisten peptidien analysointi Käyttämällä online-käänteisfasi - korkean suorituskyvyn nestefytiä yhdessä ultravihreän (UV) ja sähköhymenspektrometrian havainnointi kanssa (LC/ES-MS).
Peptidien erottelu polariteettia käyttäen LC:llä (käänteisfasi-LC)
Kun peptidi virtaa LC-sarasta, massaspektrometri tuottaa massa-aineistoa yhdessä fragmenttioioneiden aineistojen kanssa, mikä mahdollistaa meille sen järjestysinformaation määrittämisen. Käytämme järjestysinformaatiota vahvistaaksemme peptidin identiteetin ja antamaan ensisijaisen informaation.
Voimme myös tuottaa fragmentaatioinformaation peptideista kun ne pääsevät massaspektrometrin lähdealueelle LC-sarasta. Tutkimuksen vaatimusten mukaan tämä on joko valitettu LC-MS/MS tai epävalitettu, mikä voidaan pitää jonkinlaisena kaksitasoisena MS:na.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
