Nestekromatografia-massaspektrometriaan (LC-MS) perustuvat peptidikartoitustiedot tarjoavat suuren määrän tietoa natiivi- ja rekombinanttiproteiinien primääri- ja korkeamman asteen rakenteesta, mukaan lukien aminohapposekvenssin kattavuus, translaation jälkeiset modifikaatiot (PTM:t, esim. glykosylaatio). , hapetus, deamidaatio), disulfidisidokset jne.
Yaohai Bio-Pharma tarjoaa peptidikartoitusanalyysipalveluita kohdeproteiinillesi LC-MS:llä nopeuttaaksesi proteiinien rakenteen tutkimusta.
Olemme olleet mukana erilaisten suurten molekyylien proteiinirakenteen karakterisoinnissa, mukaan lukien rekombinanttialayksikkörokotteet, nano-aineet/VHH:t/ yhden domeenin vasta-aineet (sdAb), vasta-ainefragmentit, hormonit/peptidit, sytokiinit, kasvutekijät (GF), entsyymit, jne.
Peptidikartoituksen säännökset
ICHQ6B-ohjeessa suositellaan: "Tuotteen selektiivinen fragmentointi erillisiksi peptideiksi suoritetaan käyttämällä sopivia entsyymejä tai kemikaaleja ja tuloksena olevat peptidifragmentit analysoidaan HPLC:llä tai muulla sopivalla analyyttisellä menetelmällä. Peptidifragmentit tulisi tunnistaa mahdollisimman pitkälle käyttämällä tekniikoita, kuten aminohappokoostumusanalyysiä, N-terminaalista sekvensointia tai massaspektrometriaa (MS). Vaikuttavan aineen tai lääketuotteen (DP) peptidikartoitus asianmukaisesti validoidulla menetelmällä on menetelmä, jota käytetään usein varmistamaan haluttu tuoterakenne erän vapauttamiselle.
Analyyttiset metodit
| analyysi |
Menetelmät |
| Peptidikartoitus |
Proteaasin pilkkominen ja nestekromatografia-massaspektrometria (LC-MS) |
Analyyttinen menettely
1. Pelkistys ja alkylointi
Tarkoituksena on vähentää disulfidisiltoja ja estää muodostunut vapaa tioli. Disulfidisiltojen vähentäminen auttaa avaamaan proteiinirakennetta, mikä tehostaa proteolyyttistä pilkkomista. Tämä vaihe katkaisee myös ketjujen väliset sillat moniketjuisten proteiinien tapauksessa, joissa on ketjuja yhdistäviä disulfidisiltoja (esim. monoklonaaliset vasta-aineet, mAb:t).
2. Proteiinin pilkkominen entsyymeillä
Tarkoituksena on hajottaa proteiini peptideiksi. Valitsimme entsyymit perustuen proteiinin teoreettiseen järjestykseen ja proteiinin teoreettiseen pilkkomiseen entsyymeillä. Kun entsyymit valitaan tällä tavalla, tuloksena tulisi olla paras peptidikartoitusanalyysi.
3. Digesoituneiden peptidien analyysi On-line-käänteisfaasi-suuren suorituskyvyn nestekromatografian käyttäminen ultravioletti (UV) ja sähkösumutusmassaspektrometrisen ilmaisun (LC/ES-MS) kanssa.
Polaarisuuteen perustuva peptidien erotus käyttämällä LC:tä (käänteisfaasi-LC)
Kun peptidi eluoituu LC-kolonnista, massaspektrometri tuottaa massainformaatiota yhdessä fragmentti-ionitietojen kanssa, mikä mahdollistaa sekvenssitietojen määrittämisen. Käytämme sekvenssitietoja vahvistaaksemme peptidin identiteettiä ja tarjotaksemme primääritietoa.
Voimme myös tuottaa fragmentaatioinformaatiota peptideistä, kun ne tulevat massaspektrometrin lähteeseen LC-kolonnista. Tutkimuksen vaatimuksista riippuen tämä on joko selektiivinen LC-MS/MS tai ei-selektiivinen, jota voidaan pitää tandem-MS:n muotona.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
