N-glykosylointipaikan analyysi on keskeinen ymmärtääkseen glykan toiminnat. Yaohai Bio-Pharma käyttää nestemerkkityskromatografiaa-massaspectrometriaa (LC-MS) enzyymisen leikkaamisen jälkeen N-glykosylointipaikan selvittämiseksi.
Olemme olleet mukana erilaisten suurten molekyylien proteiinirakenteen karakterisoinnissa, mukaan lukien rekombinantit alijakot rokotteet, Nanokroppien/VHHt/Single-domain Antibodies (sdAbs), Antibody Fragments, Hormonit/Peptidit, Sytokiinit, Kasvuhormonit (GF), Enzymit, Kollagenaat jne.
Säädölliset vaatimukset N-glykosylointipaikalle
Mukaisesti ICH Q6B ohjeeseen, "glykoproteiinille määrätään hiilihydraattipitoisuus (neutraalit sokerit, aminosokerit ja siarinsydamerokset). Lisäksi hiilihydraattijen rakenne, oligosahkaripuun kaaviokuva (antennaprofiili) ja polypeptidi ketjun glykosylointipaikat analysoidaan mahdollisimman laajasti.
Analyyttinen menetelmä
Analyysi |
Menetelmät |
N-glykosylointialue |
Virtauskeito-massaspectrometria (LC-MS) enzyymikatkaisun jälkeen |
Menettelyt
1. Enzyymioppineet proteiinilla käyttämällä trypsinaa tai muuta proteaasiota
2. Erota fragmentteja glykopeptidejä
3. Vahvista N-glykosylointipaikka LC-MS:llä
4. Analysoi data