Glutamiinin ja asparagiinin sivuketjujen deamidaatio on yleinen muunnos proteiinien biofarmaseuttisten ominaisuuksien vaikutuksen kannalta. Deamidaatiota voi tapahtua glutamiinitähteissä, mutta yleensä paljon hitaammin. Deamidaationopeuksiin vaikuttavat lämpötila, pH, paikallinen proteiinirakenne ja viereiset aminoasyylitähteet.
Yaohai BioPharma tarjoaa aminohappodeamidoinnin testauspalvelun, jonka avulla voit havaita aminohappodeamidaation nestekromatografia-massaspektrometrialla (LC-MS).
Olemme olleet mukana erilaisten suurten molekyylien proteiinirakenteen karakterisoinnissa, mukaan lukien rekombinanttialayksikkörokotteet, nano-aineet/VHH:t/ yhden domeenin vasta-aineet (sdAb), vasta-ainefragmentit, hormonit/peptidit, sytokiinit, kasvutekijät (CF), entsyymit, jne.
Aminohappodeamidoinnin säännökset
ICH Q6B -ohjeiden mukaan deamidoidut muodot voidaan havaita ja karakterisoida kromatografisilla, elektroforeettisilla ja/tai muilla asiaankuuluvilla analyyttisilla menetelmillä.
Analyyttiset metodit
| analyysi |
Menetelmät |
| Deamidointi |
Nestekromatografia-massaspektrometria (LC-MS) |
Menettelyt
esim. asparagiinideamidaatio
1. Entsymaattinen pilkkominen
2. LC-MS High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) -olosuhteissa
3. Tietojen analysointi
Asparagiinin deamidaatio tapahtuu sukkinimidivälituotteen (Suc) kautta, joka on herkkä rasemisoitumiselle ja hydrolyysille, jolloin saadaan neljä Asp-isomeeriä, mukaan lukien L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp ja D-IsoAsp.
Teoriassa Gln-deamidointi voisi tuottaa neljä vastaavaa Glu-isomeeriä Asn-deamidoinnin kaltaisella prosessilla.
Korkean erotuskyvyn massaspektrometria tunnistaa helposti 1-Da:n massaeron Asn/Gln-pitoisten peptidien ja niitä vastaavien deamidoitujen vastineiden Asp/Glu:n välillä.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
