N-glykosylointi sivuston valtuus on fysiologinen ominaisuus glykoproteineille ja se tuottaa pääasiassa N-glykaaneja. Yaohai Bio-Pharma:n N-glykosylointi sivuston valtuus analyysi palvelu toteutetaan lyyliämisellä, vapauttamisella, rikastuttamisella ja analysoinnilla käyttämällä Nestemäinen Kromatografia-Elektroni Spraay Ionisoiva Massa Spektroskopia-Massa Spektroskopia (LC-ESI-MS/MS).
Olemme olleet mukana erilaisten suurten molekyylien proteiinirakenteen karakterisoinnissa, mukaan lukien rekombinantit alijakot rokotteet, Nanokroppien/VHHt/Single-domain Antibodies (sdAbs), Antibody Fragments, Hormonit/Peptidit, Sytokiinit, Kasvuhormonit (GF), Enzymit, Kollagenaat jne.
Säädölliset Vaatimukset N-glykosylointi Sivuston Valtuudelle
ICH Q6B -ohjeen mukaan, "glykoproteineille sokeripitoisuus (neutraalit sokerit, aminosokerit ja sialihappo) määrätään. Lisäksi sokeriketjujen rakenne, oligosakkaridiprosessi (antennaprofiili) ja polypeptidi ketjun glykosylointipaikat analysoidaan niin kauas kuin mahdollista."
Analyyttinen menetelmä
| Analyysi |
Menetelmät |
| N-glykosylointialueen varausaste |
LC-MS jälkeen deglykosylaasemman ja proteaasin hajoittamisen |
Menettelyt
1. Proteiinien hajoittaminen pieniksi peptidihiukkasiksi.
2. N-glykanin vapauttaminen endoglykosidaasi H tai PNGase F avulla. Endoglykosidaasi H katkaisee sidelman kahden GlcNAc-resiisin välillä N-linkitettyjen glykanien ytimessä, kun taas PNGase F on glykoamiina, joka katkaisee sidelman GlcNAc:n ja Asn:n välillä, vapauttaen koko sokeriketjun ja muuttamaan Asn:in Asp:ksi massan kasvatuksen 1-Da.
3. N-glykopeptidien rikastus HILIC:n (Hydrofilinen vedenkierrallinen nestesarakointi) avulla
4. N-linkitetyn glykosylointipaikan asetteluanalyysi LC-ESI-MS/MS:n avulla.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
