N-glykosylaatiokohdan käyttö on glykoproteiinien fysiologinen ominaisuus ja tuottaa pääasiassa N-glykaania. Yaohai Bio-Pharman N-glykosylaatiopaikan käyttöasteen analyysipalvelu suoritetaan pilkkomalla, vapauttamalla, rikastamalla ja analysoimalla käyttämällä nestekromatografia-elektrosuihku-ionisaatiomassaspektrometriaa-massaspektrometriaa (LC-ESI-MS/MS).
Olemme olleet mukana erilaisten suurten molekyylien proteiinirakenteen karakterisoinnissa, mukaan lukien rekombinanttialayksikkörokotteet, nano-aineet/VHH:t/ yhden domeenin vasta-aineet (sdAb), vasta-ainefragmentit, hormonit/peptidit, sytokiinit, kasvutekijät (GF), entsyymit, jne.
N-glykosylaatiopaikan käyttöastetta koskevat sääntelyvaatimukset
ICH Q6B -ohjeen mukaan "glykoproteiinien hiilihydraattipitoisuus (neutraalit sokerit, aminosokerit ja siaalihapot) määritetään. Lisäksi hiilihydraattiketjujen rakenne, oligosakkaridikuvio (antenniprofiili) ja polypeptidiketjun glykosylaatiokohta(t) analysoidaan mahdollisimman laajasti.
Analyyttinen menetelmä
| analyysi |
Menetelmät |
| N-glykosylaatiokohdan käyttöaste |
LC-MS deglykosylaasin ja proteaasin pilkkomisen jälkeen |
Menettelyt
1. Proteiinien pilkkominen pienten peptidifragmenttien muodostamiseksi.
2. N-glykaanin vapautuminen käyttämällä endoglykosidaasi H:ta tai PNGaasi F:tä. Endoglykosidaasi H katkaisee sidoksen kahden GlcNAc-tähteen välillä N-kytkettyjen glykaanien ytimessä, kun taas PNGaasi F on glykoamidaasi, joka katkaisee sidoksen GlcNAc:n ja Asn:n välillä vapauttaen koko sidoksen. sokeriketju ja muuntaa Asn Asp:ksi massan kasvaessa 1-Da.
3. N-glykopeptidin rikastus HILIC:llä (hydrofiilinen vuorovaikutusnestekromatografia)
4. N-kytketyn glykosylaatiokohdan miehityksen analyysi käyttäen LC-ESI-MS/MS:ää.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
