N-glykaanien profilointi on välttämätöntä biofarmaseuttisten valmisteiden valmistuksessa. Yaohai Bio-Pharma tarjoaa N-glykaanin profilointipalvelun, jossa käytetään vapautuneiden ja leimattujen glykaanien nestekromatografia-massaspektrometriaa (LC-MS). Yleiset vaiheet N-glykaaninäytteen valmistamiseksi sisältävät glykoproteiinin (GP) pilkkomisen, deglykosyloinnin, puhdistuksen, leimauksen/derivatisoinnin ja kiinteän faasin uuttamisen (SPE).
Olemme olleet mukana erilaisten suurten molekyylien proteiinirakenteen karakterisoinnissa, mukaan lukien rekombinanttialayksikkörokotteet, nano-aineet/VHH:t/ yhden domeenin vasta-aineet (sdAb), vasta-ainefragmentit, hormonit/peptidit, sytokiinit, kasvutekijät (GF), entsyymit, jne.
N-glykaanin profiloinnin säännökset
ICH Q6B -ohjeen mukaan "glykoproteiinien hiilihydraattipitoisuus (neutraalit sokerit, aminosokerit ja siaalihapot) määritetään. Lisäksi hiilihydraattiketjujen rakenne, oligosakkaridikuvio (antennaarinen profiili) ja polypeptidiketjun glykosylaatiokohta (-kohdat) analysoidaan siinä määrin kuin mahdollista.
Analyyttinen menetelmä
| analyysi |
Menetelmät |
| N-glykaanin profilointi |
Vapautuneiden ja leimattujen glykaanien nestekromatografia-massaspektrometria (LC-MS) -analyysi |
Menettelyt
1. Entsymaattinen glykaanin vapautuminen peptidi N-glykosidaasi F:llä (PNGaasi F)
2. Vapautuneiden glykaanien derivatisointi 2-aminobentsamidilla (2-AB)
3. Kerättyjen N-glykaanien puhdistus TSK Amide - 80 -kolonnissa, jos läsnä on suuria määriä pesuaineita, haihtumattomia suoloja tai materiaaleja, joissa on vapaita aminoryhmiä
4. Leimaus fluoresoivalla 2-aminobentsamidilla (2-AB)
5. Leimattujen N-glykaanien LC-MS-analyysi
6. Tietojen analysointi
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
