Rekombinanttiproteiinit näkevät usein paljastuneiden aminohapposivuketjujen, kuten tryptofaanin (Trp) ja metioniinin (Met), hapettumisen, mikä muuttaa proteiinien fysikaalis-kemiallisia ominaisuuksia. Nämä muutokset voivat puolestaan vaikuttaa vaikuttavien proteiinien biologisten toimintojen muutoksiin, kuten sitoutumisen menettämiseen, entsymaattisen aktiivisuuden vähenemiseen, odottamattoman nopeaan puhdistumiseen. Proteiinit ovat tärkeitä kohteita oksidatiivisille reaktioille, koska ne reagoivat nopeasti hapettimien kanssa ja niitä on runsaasti soluissa, solunulkoisissa kudoksissa ja kehon nesteissä.
Siksi proteiinien hapettumisen seuranta on kriittistä onnistuneen biofarmaseuttisen kehityksen kannalta.
Yaohai Bio-Pharma tarjoaa aminohappohapetusanalyysipalvelun, jonka avulla voit määrittää aminohappojen hapettumisen nestekromatografia-massaspektrometrialla (LC-MS).
Olemme olleet mukana erilaisten suurten molekyylien proteiinirakenteen karakterisoinnissa, mukaan lukien rekombinanttialayksikkörokotteet, nano-aineet / VHH:t / yhden domeenin vasta-aineet (sdAb), vasta-ainefragmentit, hormonit / peptidit, sytokiinit, kasvutekijät (GF), entsyymit, jne.
Aminohappohapetuksen säännökset
ICH Q6B -ohjeiden mukaan hapettuneet muodot voidaan havaita ja karakterisoida kromatografisilla, elektroforeettisilla ja/tai muilla asiaankuuluvilla analyyttisilla menetelmillä (esim. High Performance Liquid Chromatography (HPLC), kapillaarielektroforeesi, massaspektroskopia, sirkulaarinen dikroismi).
Analyyttiset metodit
| analyysi |
Menetelmät |
| Aminohappohapetus |
LC-MS, käänteisfaasinen korkean suorituskyvyn nestekromatografia (RP-HPLC) tai hydrofobinen vuorovaikutuskromatografia korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HIC-HPLC) ja massaspektrometria |
Analyyttiset menettelyt
1. Näytteen valmistelu
2. LC-MS
3. Tietojen analysointi
Tryptofaani (Trp) -tähteet ovat erityisen alttiita hapettumiselle, koska aromaattinen indoli reagoi reaktiivisten happiyhdisteiden kanssa. Trp-hapetus vaatii jonkin verran altistumista Trp-tähteille, jotka normaalisti hautautuvat proteiinin kolmiulotteiseen rakenteeseen.
Kuitenkin, kun Trp-tähteet hapetetaan, ne voivat muuttua erilaisiksi tuotteiksi, joilla on hyvin erilaiset ominaisuudet kuin alkuperäisellä Trp:llä. Yleisin Trp:n hapettumisreitti sisältää N-formyylikinureniinin muodostumisen (massaero: +32).
Toinen yleisesti hapetettu aminohappo on metioniini. Met-tähteen rikkiatomi voi hyväksyä joko yhden tai kaksi happiatomia, mikä johtaa vastaavasti sulfoksidin (massaero: +16) tai sulfonin (massaero: +32) muodostumiseen. Tämä modifikaatio on suhteellisen yleinen johtuen Metin tyypillisesti korkeasta pintaaltistumisesta.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
