Downstream Process (DSP) -kehityksen merkitys
Koko fermentaatioliemi sisältää kohdeproteiinia tai plasmidia sekä tuotteisiin ja prosessiin liittyviä epäpuhtauksia, esim. aggregaatteja, mikrobisolusubstraatteja, isäntäsoluproteiineja (HCP), isäntäsolun DNA:ta (HCD), endotoksiinia ja antibiootteja.
Siksi on keskeistä suunnitella tehokas DSP, puhdistusprosessi, poistaa tiettyjä epäpuhtauksia ja tuottaa erittäin puhdistettua ja korkealaatuista lääkeainetta. Lisäksi puhdistusprosessin optimointi voi auttaa lisäämään tuotteen talteenottoa, alentamaan kustannuksia ja parantamaan prosessin skaalautuvuutta ja toistettavuutta.
Avainsanat: prosessin kehittäminen, optimointi ja validointi, puhdistusprosessi, kromatografia, epäpuhtauksien eliminointi, HCP-poisto, HCD-eliminaatio, endotoksiinin poisto, proteiinien denaturaatio ja uudelleenlaskostus, VLP-kokoonpano, konjugaatio
Sovellus: Biolääketeollisuus, ihmislääketiede, eläinlääketiede, rokote, yhdistelmä-DNA-tekniikalla käytettävät suurimolekyyliset biologiset aineet, rekombinanttibiologiat, biologiset reagenssit
Yaohai Bio-Pharman DSP-ratkaisut
Meillä on laaja kokemus kohdeproteiinien tai -plasmidien eristämisestä monimutkaisista matriiseista kehittämällä ja optimoimalla loppupään puhdistusprosessia. Biologisten aineiden puhdistukseen soveltuvia yksikköoperaatioita on erilaisia, mukaan lukien sentrifugointi, suodatus, homogenointi, alkalinen lyysi, ultrasuodatus, saostus, proteiinien denaturointi ja uudelleenlaskostus, kromatografia jne.
Käytettävissä oleviin puhdistuskehityspalveluihimme kuuluvat:
- Koko puhdistusprosessin kehittäminen solun tai supernatantin keräämisestä lopulliseen aktiiviseen ainesosaan.
- Puhdistusprosessin optimointi tuotteeseen ja prosessiin liittyviin epäpuhtauksiin perustuen tuotteen laadun ja turvallisuuden parantamiseksi, esim. HCP, HCD, endotoksiini.
- Avainparametrien määrittely ja optimointi yhdessä tai useammassa yksikköoperaatiossa, mukaan lukien solulyysi, tangentiaalinen virtaussuodatus, hartsiseulonta, kromatografia, proteiinien denaturaatio ja uudelleenlaskostus jne.
- Prosessin optimointi laadun, tuoton, talteenoton, kustannusten ja skaalautuvuuden suhteen.
- Loppuvaiheen puhdistusprosessin validointi.
- Riskiperusteinen parametrialueen arviointi ja Design of Experiments (DoE) prosessimallinnuksessa.
Palvelun yksityiskohdat
Standardoidut proteiinin tai plasmidin puhdistusalustat perustuvat useisiin raakapuhdistusvaiheisiin ja alle neljään kromatografiavaiheeseen, mukaan lukien sieppaus, välipuhdistus ja kiillotus.
| Palvelun yksityiskohdat |
Yksikön toiminnot |
parametrit |
| Raaka puhdistus |
sentrifugointi |
Pyörimisnopeus, aika |
| Korkeapainehomogenointi |
Kiinteän aineen kokonaispitoisuus, paine, syklit |
| Jatkuva alkalinen lyysi |
Uudelleensuspendoituneiden solujen suhde lyysiliuokseen, hajoamisaika |
| Tangentiaalinen virtaussuodatus |
Kalvomateriaali ja huokoskoko, syöttövirtausnopeus kalvon läpipaineeseen (TMP), suodattimen tilavuuden ja kalvon pinta-alan suhde |
| Sademäärä |
Saostusaineen tyyppi ja pitoisuus, lisäaine, pH, lämpötila, aika |
| Denaturaatio ja uudelleenlaskostus |
Inkluusiokehoproteiinin liuottaminen |
Denaturointiainepitoisuus (esim. urea, guanidiini-HCl, vahva ioninen pesuaine), pesuaineet (esim. natriumdodekyylisulfaatti, SDS), pelkistävät aineet (esim. ditiotreitoli, DTT), kelatointiaineet (etyleenidiamiinitetraetikkahappo, EDTA), lämpötila, aika |
| Proteiinin uudelleenlaskostaminen |
Uudelleenlaskostusmenetelmät (laimennus, dialyysi tai SEC-uudelleenlaskostus), proteiinipitoisuudet, puskurit, pH, lämpötila, aika, hapettavat ja pelkistävät aineet (esim. glutationi, GSH/hapetettu glutationi, GSSH, DTT/GSSH, kysteiini/kystiinilisäaineet), pienet Molecule-lisäaineet (L-arginiini, urea, guanidiini/HCl ja pesuaineet) |
| Talteenotto, välipuhdistus ja kiillotus |
AC (affiniteettikromatografia) |
Useita erityyppisiä kromatografiahartsi/kolonni (esim. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), kolonnin pituus ja halkaisija, puskurin koostumus, injektiotilavuus, liikkuvan faasin koostumus (adsorptio ja desorptio), pH, virtausnopeus, sitoutuminen, Pesu- ja eluointiolosuhteet. |
| IEX (anionin tai kationinvaihtokromatografia) |
| HIC (Hydrofobinen vuorovaikutuskromatografia) |
| Suolanpoisto- ja/tai kokoekskluusiokromatografia (SEC) |
| RPC (käänteisfaasikromatografia) |
| MMC, sekamoodikromatografia |
Tapaustutkimus
Case 1
Meille on annettu tehtäväksi kehittää ja optimoida loppupään puhdistusprosessi proteiinin puhtauden lisäämiseksi 85 %:sta 90 %:iin ja samalla vähentää kromatografiavaiheita.
Yaohai toimitti vankan ja skaalautuvan puhdistusprosessin 3-vaiheisella kromatografialla kohdeproteiinille, bakteeriallergialle. Ja lopullinen puhtaus saavutti 95%.
Case 2
Asiakkaamme nimitti Yaohain optimoimaan viruksen kaltaisten hiukkasten (VLP) rokotteen endotoksiinien poistoprosessin.
Tiimimme suoritti kromatografiaparametrien optimoinnin ja valmisti lääkeaineen, jonka puhtaus oli 98 % ja endotoksiinijäämä 12.8 EU/mg.
Meidän kokemuksemme
- Olemme olleet mukana kehittämässä ja valmistamassa erilaisia suuria molekyylejä, mukaan lukien rekombinanttialayksikkörokotteet, VLP:t, hormonit (insuliini, GLP-1, kasvuhormoni), sytokiinit (Interleukiini-2/IL-2, IL-15, IL-21) ), kasvutekijät (EGF, FGF, NGF), nanobodit/single-domain-vasta-aineet (sdAbs), entsyymit jne.
Laitteet
Käytämme alan johtavia AKTA Pure-, AKTA Avant- ja Preparative HPLC -järjestelmiä erilaisten kromatografiamenetelmien suorittamiseen, mukaan lukien affiniteetti-, ioninvaihto-, hydrofobinen vuorovaikutus-, käänteisfaasi- ja kokoekskluusiokromatografia.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
