Downstream -prosessin (DSP) kehityksen merkitys
Koko fermointibroosissä on kohdeproteiini tai plasmidi sekä tuotteen ja prosessin liittyviä saasteita, esimerkiksi aggreaatteja, mikrobien solujen substraatteja, Isäntäsolut Proteiinit (HCP), Isäntäsolut DNA (HCD), endotoxinsa, ja antimikrobiset aineet.
Siksi on elintärkeää suunnitella tehokas DSP-purkkausprosessi, joka poistaa tietyt saasteet ja tuottaa erittäin puhdasta ja laadukasta lääkeyksikköä. Lisäksi purkkausprosessin optimointi voi auttaa lisäämään tuotteen palautusta, vähentämään kustannuksia ja parantamaan prosessin skaalautuvuutta ja toistettavuutta.
Avainsanat: prosessin kehitys, optimointi ja validointi, purkkausprosessi, kromatografia, saasteiden poisto, HCP-poisto, HCD-poisto, endotoxinsa poisto, proteiinin muuttuminen ja uudelleensidonta, VLP-assyssointi, konjugaatio
Käyttötarkoitus: Biopohjaisala, ihmislääke, eläinlääke, rokotteet, rekombinantit suuret biologiset molekyylit, rekombinantit biologiset ainekset, biologinen reahti
Yaohai Bio-Pharma:n DSP-ratkaisut
Meillä on laaja kokemus kohdeproteiinien tai plasmidien erottamisesta monimutkaisista matriiseista kehittämällä ja optimoimalla jälkikäsittelyprosessia. On olemassa erilaisia yksikkötoimintoja, jotka sopivat biologisten aineiden puhdistukseen, mukaan lukien sentrifugoiminen, suodatus, homogeenointi, alkiluysis, ultrafiltraatio, sedimentointi, proteiinin hajottaminen ja uudelleensidonta sekä kromatografia jne.
Tarjoamamme puhdistuskehityspalvelut sisältävät:
- Koko puhdistusprosessin kehittäminen solujen tai supernaatan keräämisestä loppuproducttiin.
- Puhdistusprosessin optimointi tuotteen ja prosessin liittyvien saasteiden perusteella parantaakseen tuotteen laatua ja turvallisuutta, esimerkiksi HCP, HCD, endotoxini.
- Merkkijakoisten parametrien määrittely ja optimointi yhdessä tai useammassa yksikkötoiminnassa, mukaan lukien solulysaatti, tangentiaalinen virtausfilttaus, resiinien testaus, kromatografia, proteiinin de naturointi ja refoldaus jne.
- Prosessin optimointi laadun, tuoton, toipumisen, kustannuksien ja skaalautuvuuden suhteen.
- Purkuprosessin validointi.
- Riskipohjainen parametrin arvojen arviointi ja koeasetelmien (DoE) käyttö prosessimallintamisessa.
Palvelun yksityiskohdat
Standardoituja proteiinipuhdistus- tai plasmidipuhdistuslaitteita sovelletaan useisiin alkuperäisiin puhdistusvaiheisiin ja vähemmän kuin neljään kromatografisiiin vaiheeseen, mukaan lukien kiinnitys, keskitason puhdistus ja lopullinen puhdistus.
| Palvelun yksityiskohdat |
Yksikkötoiminnot |
Parametrit |
| Alkuperäinen puhdistus |
Sentrifugoiminen |
Kierrosten nopeus, aika |
| Korkean paineen homogeenointi |
Kokonaissolisisältö, Paine, Cyklit |
| Jatkuva alkaliylitys |
Ympäröidyt solut lysisiratkaisuun suhteessa, Lysisiaika |
| Tangentiaalinen virtausfiltrointi |
Muistipaine-aine ja porokoolla, Syötteenvirtausnopeus Transmembrani-paine (TMP), Filtraattorivolumena muistipinta-alan suhde |
| Putoaminen |
Putoamisaineen tyyppi ja konsentraatio, Lisäaine, pH, Lämpötila, Aika |
| Rakenteenmuutos ja uudelleenrakenneytymisen |
Inkluusioproteiinien sulatus |
Rakennevaihteen konsentraatio (esim. Ure, Guanidiini HCl, Voimakas ioniliekiosahi), Sahimat (esim. Natrium dodecyl sulfati, SDS), Redusoijat (esim. Ditiotreitol, DTT), Chelatoijat (Etyyleendiamiinitetraasiitti, EDTA), Lämpötila, Aika |
| Proteiinien uudelleenkääntäminen |
Uudelleenkääntämismenetelmät (diluutio, dialyyssi tai SEC-uudelleenkääntäminen), Proteiinipitoisuudet, Puffarat, pH, Lämpötila, Aika, Oksidointi- ja reduktioperaattorit (esim., Glutatiioni, GSH/Oxidisoitu glutatiioni, GSSH, DTT/GSSH, Cysteini/Cystiini), Pienimuotoiset lisäaineet (L-arginiini, Ure, Guanidiini/HCl, ja pesuaineet) |
| Kiinnitys, Välivilkkaus, ja Loppuvilkkaus |
AC (Affiniteettichromatografia) |
Useita erilaisia chromatografia-resiineja/sarake (esim., AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Sarakkeen pituus ja halkaisija, Pufferin yhdistelmä, Injektiovolumeeri, Kiinteän fasin yhdistelmä (Adsorptio ja Desorptio), pH, Virtausnopeus, Kiintyminen, Pesu ja Erottaminen olosuhteet. |
| IEX (Anion tai Kation Vaihtoehto Chromatografia) |
| HIC (Hydrofobiavaihto chromatografia) |
| Desaltoi ja/tai kokoeluerajoitus chromatografia (SEC) |
| RPC (Käänteinen faasi chromatografia) |
| MMC, Sekoitusvaihto chromatografia |
Tapaustutkimus
Tapaus 1
Meille on annettu tehtäväksi kehittää ja optimoida jälkikäsittelyprosessia, jotta proteiinin siivetystaso nostetaan 85%:sta 90%:iin samalla, kun vähennetään kromatografia-askelia.
Yaohai toimitti vankkaa ja skaalautuvaa siivousprosessia kolmella kromatografia-vaiheella kohdeproteiinille, joka oli bakteriaallergia. Lopullinen siivetysaste saavutti 95%:n.
Tapaus 2
Yaohailta pyydettiin optimoimaan endotoxinien poistoprosessi viruskalttoiselle osittaisvalloitukselle (VLP) rokotteelle.
Tiimitämme suorittivat kromatografiaparametrien optimoinnin ja valmistivat aktiivisen aineen, jonka siivetysaste oli 98% ja endotoxiniresiduaali 12,8EU/mg.
Kokemuksemme
- Olemme olleet mukana erilaisten suurten molekyylien kehityksessä ja valmistuksessa, mukaan lukien rekombinoitujen alamolekyylien rokotteet, VLP:t, hormonit (insuliini, GLP-1, kasvuhormoni), sytokiinit (Interleukiini-2/IL-2, IL-15, IL-21), kasvutekijät (EGF, FGF, NGF), nanotilat/singledomain-antikeerrat (sdAbs), enzyymit, jne.
Laitteet
Käytämme teollisuuden johtavia AKTA Pure-, AKTA Avant- ja valmistusluokan HPLC-järjestelmiä erilaisten kromatografiamenetelmien suorittamiseen, mukaan lukien affiniikkakromatografia, ionivaihtokromatografia, hydrofobinen vuorovaikutus, käänteinen fasa ja kokoonpanokromatografia.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
