Uudelleenkombinoituissa proteiineissa on usein havaittavissa aminohapenoiden sivusähkien oksidointi, kuten tryptofaanin (Trp) ja methioniinin (Met), mikä muuttaa proteiinien fysikaalisia ja kemiallisia ominaisuuksia. Nämä muutokset saattavat puolestaan vaikuttaa kyseisten proteiinien biologisiin toimintoihin, kuten sidonnin menetykseen, enzyymitoiminnan heikkenemiseen tai odottamattoman nopeaan poistoon. Proteiinit ovat tärkeitä kohteita oksidaattoreaktioille, koska ne reagoivat nopeasti oksidaattoreiden kanssa ja ovat runsaasti soluissa, solun ulkopuolisia kudosia sekä kehon virtaveistoja.
Siksi proteiinien oksidoinnin seuranta on ratkaisevan tärkeää onnistuneen biopohjaisen lääkeainekehityksen kannalta.
Yaohai Bio-Pharma tarjoaa aminohapenoiden oksidointianalyysi-palvelun, joka mahdollistaa sinulle aminohapenoiden oksidoinnin määrittämisen nestesarakromatografian-massaspektrometrian (LC-MS) avulla.
Olemme olleet mukana erilaisten suurten molekyylien proteiinirakenteen karakterisoinnissa, mukaan lukien rekombinantit alayksikkö-rokotteet, Nanobodyt / VHH:t / yksinkertaiset vasta-aineet (sdAbs), vasta-aineen fragmentit, hormonit/peptidit, sytokiinit, kasvuhormonit (GF), enzyymit, kollagenaat ja niin edelleen.
Sääntelyvaatimukset aminohappo-oxidationgille
ICH Q6B -ohjeiden mukaan oksidoidut muodot voidaan havaita ja karakterisoida kromatografisilla, elektroforeettisilla tai muilla soveltuvilla analyysimenetelmillä (esim. Korkean Suorituskyvyn Nestekromatografia (HPLC), kapillaarielektroforeesi, massaspectrometria, ympyrännapaistus).
Analyttiset menetelmät
| Analyysi |
Menetelmät |
| Aminohapojen oksidointi |
LC-MS, käänteisfasinen korkean suorituskyvyn nestekromatografia (RP-HPLC) tai hydrofoobinen vuorovaikutuskromatografia korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HIC-HPLC) sekä massaspectrometria |
Analyysiprosessit
1. Näytteen valmistus
2. LC-MS
3. Data-analyysi
Tryptofaani (Trp) -jäämät ovat erityisen alttiita oksidoinnille koska aromatiikka indooli on korkean reaktiivinen reaktiivisten hapon ainekkojen kanssa. Trp-jäämien oksidointi vaatii jonkin verran altistumista, vaikka Trp-jäämät ovat yleensä peitettyinä proteiinin kolmiulotteisessa rakenteessa.
Kuitenkin, kun Trp-jäämät oksidoidutaan, ne voivat muuttua useaan erilaiseen tuotteeseen, joiden ominaisuudet eroavat merkittävästi alkuperäisestä Trp:stä. Yleisin tie Trp:n oksidointiin sisältää N-formylikinuriinin muodostumisen (Massaero: +32).
Toinen yleisesti oksidoidtu aminohappo on metioniini. Metioniinijäämän sulfiurias atomi voi ottaa vastaan joko yhden tai kaksi hapon atomeja, mikä johtaa sulfooksidin (Massaero: +16) tai sulfoonin (Massaero: +32) muodostumiseen, vastaavasti. Tämä muutos on suhteellisen yleinen takia Met:in tyypillisesti korkeaa pinnalla olevaa altistumista.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
