Plasmid: Ein kleines, kreisförmiges DNS-Molekül mit großem Potenzial

Plasmide, kleine kreisförmige DNA-Moleküle, dienen als wesentliche Vektoren für die DNA-Rekombination in der molekularbiologischen Forschung und der Gentransfertherapie. Der Ertrag und die Qualität von Plasmiden sind entscheidend, wobei der Anteil an supercoilierten Formen und der Endotoxininhalt zwei wichtige Faktoren sind, die die Plasmidqualität beeinflussen.

Plasmid-Untertypen

Aus Escherichia coli (E. coli) extrahierte Plasmide existieren in verschiedenen Untertypen: supercoiliert (SC), offen zirkulär (OC) und linear (L) (Abbildung 1). Unter ihnen weisen supercoilierte Plasmide eine ausgezeichnete Stabilität, Antigenität und eine hohe Transfektions- und Expressionseffizienz auf.

Abbildung 1. Schema der häufigen Plasmid-Untertypen

Beim Agarose-Gel-Elektrophorese von Plasmid-DNA beträgt die Reihenfolge der Migrationsgeschwindigkeit supercoilierte DNA, lineare DNA und offen zirkuläre DNA (Abbildung 2).

Abbildung 2. Agarose-Gel-Elektrophoresemuster der Migration verschiedener Plasmid-Untertypen

Yaohai Bio-Pharma hat seine Prozesse und Techniken kontinuierlich verbessert, um sicherzustellen, dass der Anteil an supercoilierten Plasmiden im Transfektionsgrad ≥85 % beträgt und bei Forschungsplasmiden ≥50 %. Im Folgenden wird ein Fallbeispiel (Abbildung 3) vorgestellt, bei dem Agarose-Gel-Elektrophorese in Kombination mit der Gel-Pro Analyzer-Software verwendet wird, um den Anteil an supercoilierten Plasmiden zu ermitteln.

Abbildung 3. Qualitätsprüfergebnisse des Anteils an supercoilierten Plasmiden

Endotoxin

Endotoxine, ein Bestandteil der Zellwand von gramnegativen Bakterien, bestehen hauptsächlich aus Lipopolysaccharid A (LPS-A) als ihrem toxischen Komponenten. Während der Plasmidextraktion werden Endotoxine in die Lysatlösung freigesetzt, was sich stark auf die Effizienz der Plasmidtransfektion in Zellen auswirkt. Darüber hinaus können sie nicht-spezifische Immunreaktionen in Zellen aktivieren, was zu falsch-positiven Ergebnissen in Experimenten führen kann.

Yaohai Bio-Pharma setzt einen "Nicht-Einführung"- und "Hoch-Entfernung"-Ansatz um, indem es während des gesamten Reinformungsprozesses streng die Verwendung von Reagenzien und Materialien mit Endotoxin kontrolliert. Das Unternehmen hat außerdem eine effiziente Methode zur Entfernung von Endotoxin entwickelt und bietet drei Stufen des Endotoxin Gehalts an: ≤0,1 EU/µg, ≤0,01 EU/µg und ≤0,005 EU/µg.

Yaohai Bio-Pharma verfügt über eine Hochdurchsatz-Plasmidextraktionsservicelinie, die in der Lage ist, innerhalb einer Woche 1 mg extrahierter Plasmide zu liefern. Standardmäßig werden mehr als sieben Qualitätskontrolltests (QC) durchgeführt, um von verschiedenen Perspektiven her hochwertige und hochstandardisierte Plasmide zu gewährleisten.

Wir suchen aktiv nach globalen Partnern, sei es Institutionen oder Einzelpersonen. Wir bieten die besten Entschädigungen der Branche. Haben Sie Fragen, zögern Sie nicht, uns zu kontaktieren: [email protected]