Plasmid: Ein kleines ringförmiges DNA-Molekül mit großem Potenzial

Plasmide, kleine ringförmige DNA-Moleküle, dienen als wichtige Vektoren für die DNA-Rekombination in der molekularbiologischen Forschung und Gentherapie. Ausbeute und Qualität der Plasmide sind entscheidend, wobei der Supercoiled-Anteil und der Endotoxingehalt zwei wichtige Faktoren sind, die die Plasmidqualität beeinflussen.

Plasmid-Subtypen

Aus Escherichia coli (E. coli) extrahierte Plasmide gibt es in verschiedenen Untertypen: supercoiled (SC), offen zirkuläre (OC) und lineare (L) Formen (Abbildung 1). Unter ihnen weisen supercoiled Plasmide eine ausgezeichnete Stabilität, Antigenität und hohe Transfektions- und Expressionseffizienz auf.

Abbildung 1. Schematische Darstellung häufiger Plasmidsubtypen

Bei der Agarosegelelektrophorese von Plasmid-DNA ist die Reihenfolge der Migrationsgeschwindigkeit: supercoiled DNA, lineare DNA und offene zirkuläre DNA (Abbildung 2).

Abbildung 2. Migrationsmuster verschiedener Plasmidsubtypen bei der Agarosegelelektrophorese

Yaohai Bio-Pharma hat seine Prozesse und Techniken kontinuierlich verbessert, um sicherzustellen, dass der supercoiled-Anteil von Plasmiden in Transfektionsqualität ≥85 % und der von Plasmiden in Forschungsqualität ≥50 % beträgt. Nachfolgend sehen Sie eine Falldemonstration (Abbildung 3), bei der die Agarosegelelektrophorese mit der Gel-Pro Analyzer-Software kombiniert wird, um den supercoiled-Anteil zu ermitteln.

Abbildung 3. Ergebnisse der Qualitätsprüfung des supercoiled Plasmidanteils

Endotoxin

Endotoxin, ein Bestandteil der Zellwand gramnegativer Bakterien, besteht hauptsächlich aus Lipopolysaccharid A (LPS-A) als toxischer Komponente. Während der Plasmidextraktion wird Endotoxin in die Lyselösung freigesetzt, was die Effizienz der Plasmidtransfektion in Zellen stark beeinträchtigt. Darüber hinaus kann es unspezifische Immunreaktionen in Zellen aktivieren, was in Experimenten zu falsch positiven Ergebnissen führt.

Yaohai Bio-Pharma verfolgt einen Ansatz, bei dem keine Stoffe eingeführt werden und bei dem eine hohe Entfernung im Vordergrund steht. Dabei wird die Verwendung von Reagenzien und Materialien, die Endotoxine enthalten, während des gesamten Reinigungsprozesses streng kontrolliert. Das Unternehmen hat außerdem eine effiziente Methode zur Endotoxinentfernung entwickelt, die drei Endotoxingehaltsstufen bietet: ≤0.1 EU/µg, ≤0.01 EU/µg und ≤0.005 EU/µg.

Yaohai Bio-Pharma verfügt über eine Hochdurchsatz-Plasmidextraktionslinie, die 1 mg extrahierte Plasmide in nur einer Woche liefern kann. Standardmäßig bietet es mehr als sieben Qualitätskontrolltests (QC), um die Lieferung hochwertiger Plasmide mit hohem Standard aus mehreren Perspektiven sicherzustellen.

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