Qualitätskontrolle und Anwendungen rekombinanter Proteine

Die Qualitätskontrolle rekombinanter Proteine ​​ist für die Zuverlässigkeit und Reproduzierbarkeit experimenteller Daten von entscheidender Bedeutung. Jeder Schritt, vom Projektdesign bis zum Produktionsprozess, erfordert strenge Qualitätskontrollstrategien.

Qualitätskontrollstrategien

Der Industriesektor hält sich an strenge Standardarbeitsanweisungen, während die akademische Gemeinschaft ihr Fachwissen erweitern muss, um die Reproduzierbarkeit der Daten zu verbessern. Proteine ​​mit spezifischen biologischen Anwendungen oder biochemischen Eigenschaften erfordern maßgeschneiderte Qualitätskontrollstrategien.

Herausfordernde Beispiele und Lösungen

Yaohai Bio-Pharma verfügt über umfangreiche Erfahrung in der Produktion und Reinigung rekombinanter Proteine ​​und stellt mit einem Expertenteam sicher, dass Ihre Proteinproduktion mit hoher Reinheit abgeschlossen wird. Yaohai nutzt unsere Erfahrung aus Hunderten von Projekten und fasst zusammen, wie die Proteinreinigung optimiert werden kann.

Nukleinsäurebindende Proteine: Schritte zur Entfernung von Nukleinsäuren, wie Nukleasen oder PEI-Fällung, sind notwendig. Das Verhältnis A260 nm/A280 nm wird überwacht, um eine Nukleinsäurekontamination festzustellen.

Maus-Ferritin-Schwerkette 1 für Kryo-EM: Die Reinigungsschritte müssen optimiert und Nukleasen hinzugefügt werden, um das A260 nm/A280 nm-Verhältnis zu reduzieren und die Proteinreinheit sicherzustellen.

Chimäres Protein Menschliches dsRBEC: Bei der Zelllyse wird ein harnstoffhaltiger Puffer verwendet, gefolgt von einer Neufaltung auf der Säule, um funktionell aktive Proteine ​​zu erhalten.

Proteine, die zweiwertige Kationen binden: Während der Expression und Reinigung müssen bestimmte zweiwertige Kationen hinzugefügt werden und Chelatbildner sollten vermieden werden.

Eisen-Schwefel-Proteine: Imidazol sollte vermieden werden, um eine Zerstörung des [2Fe ± 2S]-Clusters zu verhindern und so die korrekte Proteinfaltung und -funktion sicherzustellen.

Lösliches Fragment von LLT1: Das Mutantendesign optimiert die Bildung von Disulfidbrücken und die Proteinfaltung, was zu stabilen Proteinen mit hoher Ausbeute führt.

CLK1-Kinase-Kristallisation: Durch die Koexpression mit λ-Phosphatase werden Phosphate von Phosphorylierungsstellen entfernt. Mithilfe von Größenausschlusschromatographie (SEC) und Anionenaustauschchromatographie wird homogenes CLK1 ohne heterogene Phosphorylierung erhalten.

Proteine ​​für den Antigengebrauch: Eine Reinheitsprüfung ist notwendig, um eine Kontamination mit hochimmunogenen Proteinen zu vermeiden. Bei Strukturepitop-Antikörpern muss die dreidimensionale Konformation des Antigens erhalten bleiben.

Zur Aggregation neigende Proteine: Um Aggregationsprobleme zu begrenzen, werden Strategien wie das Screening unterschiedlicher Stämme und die Absenkung der Kultivierungstemperaturen eingesetzt und schnelle Reinigungsstrategien entwickelt.

Endotoxin-Entfernung: Methoden wie die Positivladungschromatographie und die Polykation-Liganden-Affinitätschromatographie entfernen Endotoxine und stellen sicher, dass die LPS-Werte unter den Anwendungsgrenzen liegen.

Proteinkomplexe: Untereinheiten werden separat exprimiert und in vitro zusammengesetzt oder gemeinsam exprimiert, um funktionelle Komplexe zu bilden. Die Integrität der Komplexe wird anhand der Homogenität und der Molmasse bewertet.

Schlussfolgerung

Die Proteinproduktion beginnt mit einem strategischen Design unter Berücksichtigung biochemischer Merkmale und Anwendungen. Während der Expression, Reinigung und Qualitätskontrolle werden Bedingungen und Methoden hinsichtlich Stabilität, Nichtaggregation und nativem Zustand optimiert. Gereinigte Proteine ​​dienen verschiedenen nachgelagerten Verwendungszwecken, beispielsweise der biophysikalischen Charakterisierung.

Yaohai Bio-Pharma ist außerdem aktiv auf der Suche nach institutionellen oder individuellen globalen Partnern und bietet die wettbewerbsfähigste Vergütung der Branche. Wenn Sie Fragen haben, können Sie uns gerne kontaktieren: [email protected]