Produktionsproces for eGFP mRNA

Produktionen af eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA involverer en række molekylbiologiske teknikker for at generere et funktionelt RNA-molekyle, der kodere for udtrykket af eGFP. Inden for området eGFP mRNA har Yaohai Bio-Pharma opbygget omfattende erfaring i at imødekomme kundernes specifikke behov. Ved at udnytte vores erfaring har vi samlet processens trin til produktion af EGFP mRNA.

1. Kloning af eGFP-genen : Det er nødvendigt at få gensekvensen, der koder for eGFP. Denne gen klones typisk fra en eksisterende plasmidvektor eller syntetiseres kunstigt baseret på den kendte nukleotidsekvens. Den klonede gen bekræftes derefter ved sekvensering for at sikre nøjagtighed.
2. Genoptimering til udtryk : For optimal udtryk i det målorganisme (f.eks. pattedyrsceller, bakterier eller in vitro transskriptionssystemer), kan eGFP-genen gennemgå kodonoptimering. Dette indebærer at erstatte sjældne kodoner i den oprindelige sekvens med mere hyppigt brugte i værtsorganismen, hvilket øger sandsynligheden for effektiv oversættelse.
3. In vitro Forberedelse af Transskriptionsmal : Når den optimerede gen er klar, indarbejdes den i en passende vektor, ofte en plasmid, der indeholder reguleringselementer, der er nødvendige for transskription (f.eks. en promotorsekvens). Denne plasmid fungerer som et mal for in vitro transskription.
4. In vitro Transskription : Ved hjælp af den forberedte plasmidtemplate udføres in vitro transkription for at syntetisere eGFP mRNA. Dette proces omfatter brugen af RNA polymerase-enzymers, som genkender promotorsekvensen og initierer transkriptionen, hvilket producerer en komplementær RNA-tråd til DNA-skabelonen. Afhængigt af det ønskede anvendelsesområde kan mRNA'en blive capperet, polyadenyleret og/eller modificeret for at forbedre stabilitten og oversættelseseffektiviteten.
5. Rengøring og kvalitetskontrol : Den syntetiserede eGFP mRNA renes derefter for at fjerne eventuelle forurenninger, herunder DNA, protein og frie nukleotider. Rengøringsmetoder kan omfatte gelelektroforese, kolonnekromatografi eller bead-baseret adskillelse. Efter renningen analyseres mRNA'en på kvalitet, herunder koncentration, renhed og integritet, ved hjælp af teknikker såsom UV-Vis-spektrofotometri og gelelektroforese.
6. Lagering og levering : Den rene eGFP mRNA opbevares typisk ved lave temperaturer for at opretholde stabilitten. Til eksperimentel brug kan mRNA indføres i celler ved forskellige metoder, herunder elektroporation, lipofection eller virale vektorer, alt efter den specifikke anvendelse og celtypen.
7. Ekspression og Verifikation : Når mRNA'en er inde i cellen, oversættes eGFP mRNA'et til det forbedrede grønne fluorescerende protein, hvilket kan visualiseres ved hjælp af fluorescensmikroskopi. Dette gør det muligt at verificere succesfuld mRNA-produktion, levering og ekspression.

I sammentaget indebærer produktionen af eGFP mRNA at klone genet, optimere det for ekspression, forberede en in vitro-transskriptionsmal, udføre transskriptionsreaktionen, rense den resulterende mRNA og endelig levere den i celler til ekspression og verifikation.

Vi søger også aktivt globale partnere, både institutionelle og individuelle. Vi tilbyder den mest konkurrencedygtige kompensation i branchen. Hvis du har nogen spørgsmål, tøv ikke med at kontakte os: [email protected]