Fremstillingsproces af eGFP mRNA

Produktionen af ​​eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA involverer en række molekylærbiologiske teknikker til at generere et funktionelt RNA-molekyle, der koder for ekspressionen af ​​eGFP. Inden for eGFP-mRNA-området har Yaohai Bio-Pharma akkumuleret omfattende erfaring med at imødekomme kundernes specifikke behov. Ved at udnytte vores erfaring har vi syntetiseret procesflowet til fremstilling af EGFP mRNA.

1. Kloning af eGFP-genet: Det for at opnå gensekvensen, der koder for eGFP. Dette gen er typisk klonet fra en allerede eksisterende plasmidvektor eller syntetiseret kunstigt baseret på den kendte nukleotidsekvens. Det klonede gen verificeres derefter gennem sekventering for at sikre nøjagtighed.
2. Genoptimering til udtryk: For optimal ekspression i målsystemet (f.eks. pattedyrsceller, bakterier eller in vitro-transkriptionssystemer) kan eGFP-genet gennemgå kodonoptimering. Dette involverer udskiftning af sjældne kodoner i den oprindelige sekvens med hyppigere anvendte kodoner i værtsorganismen, hvilket øger chancerne for effektiv translation.
3. In vitro Forberedelse af transskriptionsskabelon: Når det optimerede gen er klar, inkorporeres det i en egnet vektor, ofte et plasmid, der indeholder regulatoriske elementer, der er nødvendige for transkription (f.eks. en promotorsekvens). Dette plasmid tjener som skabelon til in vitro-transkription.
4. In vitro Transskription: Ved hjælp af den forberedte plasmidskabelon udføres in vitro-transkription for at syntetisere eGFP-mRNA. Denne proces involverer brugen af ​​RNA-polymerase-enzymer, som genkender promotorsekvensen og initierer transkription, hvilket producerer en komplementær RNA-streng til DNA-skabelonen. Afhængigt af den ønskede anvendelse kan mRNA'et være lukket, polyadenyleret og/eller modificeret for at øge stabilitet og translationseffektivitet.
5. Rensning og kvalitetskontrol: Det syntetiserede eGFP-mRNA renses derefter for at fjerne eventuelle kontaminanter, herunder DNA, proteiner og frie nukleotider. Oprensningsmetoder kan omfatte gelelektroforese, søjlekromatografi eller perlebaseret adskillelse. Efter oprensning analyseres mRNA'et for kvalitet, herunder koncentration, renhed og integritet, ved hjælp af teknikker såsom UV-Vis spektrofotometri og gelelektroforese.
6. Opbevaring og levering: Det oprensede eGFP-mRNA opbevares typisk ved lave temperaturer for at opretholde stabilitet. Til eksperimentel brug kan mRNA'et leveres ind i celler ved hjælp af forskellige metoder, herunder elektroporation, lipofektion eller virale vektorer, afhængigt af den specifikke anvendelse og målcelletype.
7. Udtryk og verifikation: Når først cellen er inde i cellen, oversættes eGFP-mRNA'et til det forbedrede grønne fluorescerende protein, som kan visualiseres ved hjælp af fluorescensmikroskopi. Dette giver mulighed for verifikation af vellykket mRNA-produktion, levering og ekspression.

Sammenfattende involverer produktionen af ​​eGFP mRNA kloning af genet, optimering af det til ekspression, forberedelse af en in vitro transkriptionsskabelon, udførelse af transkriptionsreaktionen, oprensning af det resulterende mRNA og til sidst levering af det til celler til ekspression og verifikation.

Vi søger også aktivt institutionelle eller individuelle globale partnere. Vi tilbyder den mest konkurrencedygtige kompensation i branchen. Hvis du har spørgsmål, er du velkommen til at kontakte os: [email protected]