Innovative sammensætningsmetoder til storstilts genetsynthese

Teknologien til samling af store DNA-fraktioner fra bunden op er grundpilen i genetisk syntese, hvilket omfatter metoder såsom BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson-samling, CPEC og Overlap PCR. På grund af begrænsningerne i den nuværende teknologi med hensyn til at syntetisere DNA af genlængde nøjagtigt på én gang, er det nødvendigt at kombinere in vitro og in vivo-samlingsmetoder for at samle oligonukleotidfraktioner, der er syntetiseret i segmenter, til lange DNA-fraktioner.

In vitro-samlingsmetoder

De er inddelt i forskellige metoder ud fra fragmentstørrelse og sekvenskarakteristika, med en fælles krav om at bruge værktøjenzymer. Overlap PCR, der bygger på DNA polymerase-metoden, er simpel og hurtig i operationen. BioBrick- og BglBrick-metoderne, som afhænger af isoschizomere, gør det muligt at foretage standardiseret montering, selvom BioBrick-metoden ikke er egnet til fusioneringsproteiner. Golden Gate-kloningmetoden, der bygger på type IIS restriktionsenzym, tillader effektiv无缝ligation af flere fragmenter. Gibson-assembleringsmetoden, der udnytter en kombination af flere værktøjenzymer, gør det muligt at foretage seamless ligations med fragmentstørrelser, der kan nå flere hundrede kb. Standardiseret design af DNA-komponenter forbedrer udnyttelsesgraden af eksisterende fragmenter.

In vivo assembleringsteknikker

Selvom in vitro samlede fragmenter kan nå størrelsen flere hundrede kb, men uddelingen er ofte utilstrækkelig, hvilket gør det nødvendigt at foretage forstærkning ved hjælp af organismer såsom Escherichia coli. Ved sammenføjning af fragmenter overstigende 20 kb anvendes ofte rekombinante systemer inden for organismer, herunder Bacillus subtilis, gær og modificerede bakterier. Gær, som en hyppigt brugt værtsorganisme, har i årevis været kendt for sin effektive homologe rekombinationsevne. Den kan bruges til at samle artificielle kromosomer op til flere megabaser (Mb) i længde. Desuden udviser Saccharomyces cerevisiae en ekstraordinær tålmodighed overfor kromosomlængde, hvilket giver en teoretisk grundlag for at bruge gær til at konstruere ultra-lange kromosomer i højere organismer.

Ansøgninger

Yaohai Bio-Pharma anvender primært to monteringsmetoder til genetisk syntese: ligase-montage og DNA-polymerase-montage. Metoden med ligase-forbindelse kobler overlappende og hybridiserede 5'-fosfaterede oligonukleotidfragmenter til dobbeltstrandede DNA ved hjælp af DNA-ligase. Polymerase-montagemetoden bruger DNA-polymerase til at udvide de overlappende oligonukleotidfragmenter gennem hybridisering, hvilket giver en blanding af forskellige længder, og endelig forstærker den de fuldt ud monterede fragmenter ved hjælp af primere. Yaohai kan hjælpe kunderne med at opfylde specifikke krav inden for genetisk syntese.

Vi søger også aktivt globale partnere, både institutionelle og individuelle. Vi tilbyder den mest konkurrencedygtige kompensation i branchen. Hvis du har nogen spørgsmål, tøv ikke med at kontakte os: [email protected]