Fremme af Reporter RNA Modifikationsmetoder

Når man vælger, hvilken metode for reporter mRNA-modifikationer der er foretrukket, findes der ingen endelig svar, da hver metode og hvert reporter-genes har sine egne fordele og relevante situationer. Her er nogle almindelige mRNA-modifikationsmetoder og reporter-genes samt deres karakteristika og egnethed.

mRNA-modifikationsmetoder

Metylering:

1. m6A : forbundet med mRNA-stabilitet, splicing, oversættelse og miRNA-behandling. Udfordringer ved detektering inkluderer valg af antistoffer og lokalisation.
2. 5' Cap Nm : forbedrer stabilitet, splicing, polyadenylation og kernen eksport. Hjælper med at skelne mellem selv-RNA og fremmed RNA.
3. Pseudouridylation : ændrer kodoner, forbedrer stabilitet og reagerer på stress. Katalyseres af pseudouridinsyntaser.

Introduktion af ikke-naturlige nukleotider:

1. Indført under transkription med en dobbelt kemisk modificeringsstrategi. Det forbedrer stabiliteit, effektivitet og proteinekspression.

Reporter Genes

1. Grøn Fluorescerende Protein Gen (GFP) : Fordele: Let at detektere, stabile fluorescens egenskaber, ikke toksisk for celler, egnet til livecellebilledgørelse. Ulemper: Begrænset fluorescensintensitet.
2. Forstærket Grøn Fluorescerende Protein (eGFP) : Fordele: Over 6 gange lyser end vilde typen GFP, hvilket gør det mere egnet som reporter gen til studering af genekspression, regulering, celledifferentiation og proteinlokalisation og transport indenfor organismer.
3. Røde Fluorescerende Proteiner (f.eks., mCherry) : Fordele: Længere ekscitations- og emissionsbølgelængder, hvilket resulterer i lavere baggrund under intracellebilledgørelse, fremragende fluorescenslys og fotostabilitet samt lavere celletoksicitet. Ulemper: Måske ikke brugt så hyppigt som GFP under visse eksperimentelle betingelser.
4. Gløjfejlsluciferase : Fordele: Ved tilstedeværelse af ATP, magnesiumioner og oxygen, kan det katalysere oxidationen af luciferin til oxyluciferin, hvilket udsender bioluminescens. Det er egnet til at bruges som kontrol for at undersøge oversættelseseffektiviteten af målgen i pattedyrsceller, celleviden og in vivo billedanalyser.

Konklusion

Når man vælger, hvilken metode for reporter mRNA-modifikationer der præferes, afhænger det af specifikke eksperimentelle mål, forskningsbaggrunde og eksperimentelle betingelser. For eksempel, hvis høj følsomhed kræves, kan eGFP være en bedre valgmulighed. Hvis billeder på længere bølgelængder skal tages for at reducere baggrundsstøj, kan røde fluorescerende proteiner som mCherry være mere egnet. Desuden, baseret på de specifikke modifikationsbehov for mRNA (f.eks. for at forbedre stabilitet, forbedre oversættelseseffektivitet), kan den tilsvarende modifikationsmetode vælges.

Som den første og største mikrobiologiske biologiske CRDMO i Større Kina tilbyder Yaohai Bio-Pharma omfattende, tilmålede løsninger eller enkeltstående services, der omfatter alt fra RNA-syntese, stamningeneringering og -konstruktion, udvikling af opstrøms- og nedstrømsprocesser til GMP eller ikke-GMP-niveau produktion af lægemidler, samt fyldebetingelser for forskellige modaliteter såsom mRNA, circRNA, plasmid-RNA, rekombinante proteiner, peptider, enzymmer, enkeltdomæneantistoffer og VLP'er til brug indenfor både menneskelig og veterinærmedicin.

Yaohai Bio-Pharma søger også aktivt globale partnere, både institutionelle og individuelle, og tilbyder den mest konkurrencedygtige kompensation i branchen. Hvis du har nogen spørgsmål, tøv ikke med at kontakte os: [email protected]