Championing Reporter RNA modifikationsmetoder

Når man vælger hvilken metode til reporter-mRNA-modifikationer, der er at foretrække, er der ikke noget endeligt svar, da hver metode og reportergen har sine egne fordele og anvendelige scenarier. Her er nogle almindelige mRNA-modifikationsmetoder og reportergener sammen med deres egenskaber og egnethed.

mRNA-modifikationsmetoder

Methylering:

1. m6A: Forbundet med mRNA-stabilitet, splejsning, translation og miRNA-behandling. Detektionsudfordringer omfatter antistofselektion og lokalisering.
2. 5' Cap Nm: Forbedrer stabilitet, splejsning, polyadenylering og nuklear eksport. Hjælper med at skelne selv-RNA fra fremmed RNA.
3. Pseudouridylering: Ændrer kodoner, øger stabiliteten og reagerer på stress. Katalyseret af pseudouridinsyntaser.

Introduktioner af ikke-naturlige nukleotider:

1. Indført under transkription med en dobbelt kemisk modifikationsstrategi. Det forbedrer stabilitet, effektivitet og proteinekspression.

Reporter Genes

1. Grønt fluorescerende proteingen (GFP): Fordele: Let at detektere, stabile fluorescensegenskaber, ikke-toksisk for celler, velegnet til levende cellebilleddannelse. Ulemper: Begrænset fluorescensintensitet.
2. Forbedret grønt fluorescerende protein (eGFP): Fordele: Over 6 gange lysere end vildtype GFP, hvilket gør det mere egnet som et reportergen til at studere genekspression, regulering, celledifferentiering og proteinlokalisering og -transport i organismer.
3. Røde fluorescerende proteiner (f.eks. mCherry): Fordele: Længere excitations- og emissionsbølgelængder, hvilket resulterer i lavere baggrund under intracellulær billeddannelse, fremragende fluorescenslysstyrke og fotostabilitet og lavere cellulær toksicitet. Ulemper: Kan ikke være så almindeligt anvendt som GFP under visse eksperimentelle forhold.
4. Firefly Luciferase: Fordele: I nærvær af ATP, magnesiumioner og oxygen kan det katalysere oxidationen af ​​luciferin til oxyluciferin og udsende bioluminescens. Det er velegnet til brug som kontrol til at studere translationseffektiviteten af ​​målgener i pattedyrsceller, cellelevedygtighed og in vivo billeddannelsesassays.

Konklusion

Når man vælger hvilken metode til reporter-mRNA-modifikationer, der er at foretrække, afhænger det af specifikke eksperimentelle mål, forskningsbaggrunde og eksperimentelle forhold. For eksempel, hvis høj følsomhed er påkrævet, kan eGFP være et bedre valg. Hvis billeddannelse ved længere bølgelængder er nødvendig for at reducere baggrundsinterferens, kan røde fluorescerende proteiner som mCherry være mere egnede. Derudover kan den tilsvarende modifikationsmetode vælges baseret på mRNA's specifikke modifikationsbehov (f.eks. forbedring af stabilitet, forbedring af translationseffektivitet).

Som den første og største mikrobielle biologiske CRDMO i Greater China tilbyder Yaohai Bio-Pharma end-to-end one-stop skræddersyede løsninger eller selvstændige tjenester lige fra RNA-syntese, strain engineering og konstruktion, upstream og downstream procesudvikling, til GMP eller ikke -GMP-niveau fremstilling af lægemiddelstof samt udfyldnings- og efterbehandlingstjenester til forskellige modaliteter, såsom mRNA, circRNA, plasmid-RNA, rekombinante proteiner, peptider, enzymer, enkelt domæne antistoffer og VLP'er til human og veterinær brug.

Yaohai Bio-Pharma søger også aktivt institutionelle eller individuelle globale partnere og tilbyder den mest konkurrencedygtige kompensation i branchen. Hvis du har spørgsmål, er du velkommen til at kontakte os: [email protected]