Ahoj. Někdy jste se asi ptali, jak vědci dokážou klonovat RNA? RNA je ta speciální molekula, kterou najdeme v našich buňkách a která dělá spoustu věcí pro výrobu bílkovin, a bílkoviny jsou tam, aby mohl náš tělo dělat všechny správné věci. V tomto dílu provedeme postupem mnohem zajímavějšího protokolu používaného výzkumníky: In vitro transkript. A to znamená, že vědci berou RNA a dělají z ní hodně v testovacím rource (což je ten malý sáček, který laboratoře používají), takže pojďme projít každým krokem.
Když jsem dokončil svůj předchozí příspěvek, uvědomil jsem si, že poslední mohl být trochu suchý - přijďte se zapojit do zábavnějších laboratorních příspěvků; takže, v souladu s formou, teď už jste úplně na vlaku zábavy (tedy výroby RNA): Jaké reagenty a co budete potřebovat pro svůj EF?? K dosažení toho budeme potřebovat speciální bílkoviny nazývané enzymy, shodné s produktem Yaohai Výroba rekombinantního Midkine . Katalyzuje chemické reakce, tyto enzymy pomáhají při rozkladu. Teď potřebujeme jen naši část DNA. Tato funkce je DNA, kterou používáme jako šablonu pro kopírování do naší RNA. Další regulační sekvence v RNA, konkrétně nucleotidy, jsou také potřebné. Tyto nucleotidy jsou jako malé stavební kameny, které je třeba složit, aby vznikla RNA. Používáme také krátké trubky malého průměru, abychom mohli provést organoleptickou analýzu na ostatních vzorcích. Nakonec potřebujeme stroj (termocykler), který zajistí, aby naše reakce byly u správné teploty. Navíc můžeme potřebovat několik nástrojů a produktů pro určité experimenty.
Tady se věci rozcházejí, máme jednu RNA vlákno a teď bychom chtěli mít více kopií tohoto vlákna, také Výroba konjugovaných vakcín VLP vyvinutý Yaohaem. Způsob, jak toho dosáhnout, je použití jiného enzymu; T7 RNA polymerázy. Tento jedinečný enzym například rozpoznává specifické oblasti uvnitř RNA. Skočný konus pro vytvoření mnohem více kopií RNA v dalším postupu. V tomto bodě bude k RNA vláknů přidáván T7 RNA polymerázou, dokud nebude vytvořen velký množství transkriptu, nebo dokud nám to nepřikáže zastavit.
Po tom, co jsme izolovali RNA co nejvíce, posuňte se dále dolů, abyste zjistili, jak ji vyčistit a uložit pro budoucí použití. Rhoades: Některé z těchto metod jsou trochu extrémnější v oblasti izolace RNA — nepoužíváte je vždy, ale někdy pro určité typy experimentů je to nutné. Jakmile bude naše RNA volná od jakýchkoli kontaminantů, může být uložena zmrazena. Tímto způsobem je bezpečná a můžeme ji pak použít v různých experimentech.
Kvalita výchozího materiálu: ujistěte se, že váš DNA šablon je čistá a není úplně poškozená. Můžete také doplnit čerstvě rekonstituované nukleotidy a nově rozmrazené enzymy, aby byly maximalizovány šance na úspěšný experiment.
Přizpůsobení podmínek Všechny enzymy a jejich nukleotidy lépe fungují při specifické teplotě a pH v rámci vašeho těla, stejně jako u Yaohaiho Červeně fluoreskující mRNA . Nyní upravte detaily mezi podmínkami, dokud nedojdete k tomu, co je klíčové pro vaše jedinečné nastavení.
Reverzní transcriptáza je neobvyklý enzym, protože z RNA molekuly vytváří kopii DNA. Použili jsme jak DNAs, tak i DNA šablonu (cDNA) jako vstup pro naši in vitro metodu generování RNA. Nicméně ve většině experimentů by vědci chtěli převádět DNA na RNA. Reverzní transkripcí dostává tento proces své jméno stejně jako testování distribuce poly-A u mRNA vyrobeno společností Yaohai. Je to neocenitelný nástroj po celé vědě - od studia RNA molekul uvnitř buněk až po produkci komplementárních DNA vláken pro další experimenty.
Skutečné experimenty, ve kterých se RNA používá jednu z nejpoužívanějších molekulárních nástrojů spolu s produkty firmy Yaohai Produkce vakcínu VLP v E. coli kvantitativní testy: Tyto testy mohou odhalit množství jakéhokoli konkrétního molekulu přítomného v vzorku. Například, vědci mohou syntetizovat in vitro přípravu transkriptů z RNA kopii odvozených z cílového genu umístěného v buňce. Diagnostika pak může provést test na tyto kopie; v případě, že hledají RNA, diagnostika může spustit polymerázovou řetězovou reakci (PCR) pro zesílení těchto kopií v vzorku. To umožňuje vědcům vidět, jak jsou geny vyjádřeny v buňkách, a dokonce umožňuje některé extrémně vysokoprůchodné testy, jako je přítomnost bakteriální nebo virózní infekce, a diagnostikovat genetické poruchy.
in vitro Transcript Protocol je předním poskytovatelem služeb CDMO v oblasti mikrobiologických biologik. Soustředíme se na vakcíny a léčivé přípravky produkované pomocí mikroorganismů, které jsou vhodné pro péči o lidské zdraví, veterinární aplikace a péči o zdraví domácích zvířat. Disponujeme nejmodernějšími platformami výzkumu a vývoje (RD) a technologiemi výroby, které pokrývají celý proces od vývoje mikroorganismových šťáv a bank buněk, přes vývoj procesů a metod, až po klinickou a komerční výrobu, což zajistí úspěšné dodávky inovativních řešení. Během času jsme si osvojili rozsáhlé znalosti o biozpracování založeném na mikroorganismech. Bylo úspěšně dokončeno přes 200 projektů a pomáháme svým klientům dodržovat předpisy, jako jsou ty americké FDA a evropské EMA. Rovněž jim pomáháme s navigací v australském TGA a čínském NMPA. Naše profesionální odbornost a bohaté zkušenosti nám umožňují rychle reagovat na tržní poptávky a nabízet přizpůsobené služby CDMO.
Yaohai Bio-Pharma má zkušenosti v produkci biologických látek vyrobených pomocí in vitro Transkriptního protokolu. Nabízíme přizpůsobená řešení v oblasti výzkumu a vývoje (RD) a výroby, zatímco zajistíme, aby nebyly žádné rizika. Byli jsme zapojeni do různých modalit, jako jsou subunitové vakcíny rekombinované, peptidové hormony, cytokiny, růstové faktory, jednodoménové antikoropta enzymy, plazmidová DNA mRNA a mnoho dalšího. Jsme specialisté na mnoho mikroorganismů, včetně kvasnic extracelulární a intracelulární sekrece (výnos až 15g/L) a bakterie intracelulárně rozpustné a inkluzní těleso (výnos až 10g/L). Vytvořili jsme také fermentační platformu BSL-2 pro výrobu bakteriálních vakcín. Zaměřujeme se na zlepšování procesů, zvyšování výnosů produktu a snižování nákladů na výrobu. Pomocí silné technologické skupiny můžeme zajistit spolehlivé a rychlé dodání projektu, které vaše produkt dříve dostane na trh.
Yaohai Bio-Pharma, jedna z deseti největších výrobců biologických produktů, se specializuje na mikrobiální fermentaci. Postavili jsme moderní zařízení s silnou RD kapacitou a pokročilým vybavením. Máme pět výrobních link pro látky podléhající GMP požadavkům pro mikrobiální fermentaci a čištění. Navíc máme dvě automatizované linky na vyplňování kartridžů, flašek a přednaplněných špendlíků. Rozsah fermentačních kapacit sahá od in vitro Transcript Protocol do 2000L. Specifikace pro vyplňování flašek se pohybují od 1ml až po 25ml. Specifikace pro vyplňování přednaplněných špendlíků nebo kartridžů dosahují asi 1-3ml. Naše cGMP-slučitelné produkční zařízení zajišťuje pravidelné dodávky klinických vzorků i komerčních položek. Naše továrna vyrábí velké molekuly, které jsou distribuovány po celém světě.
Yaohai BioPharma je jedna z deseti největších mikrobiologických CDMO, která začleňuje in vitro Transkripcní protokol a také regulační záležitosti. Máme systém řízení kvality, který je v souladu s aktuálními GMP standardy a globálními předpisy. Naše týmy odborníků na regulace jsou obeznámeny s globálními regulačními rámci, aby urychlily uvedení biologických produktů na trh. Zajišťujeme stopovatelné produkční procesy, kvalitní produkty a dodržování pravidel US FDA a EU EMA. TGA Austrálie a NMPA Číny jsou rovněž spokojeny. Yaohai BioPharma úspěšně prošla auditem na místě od Kvalifikované osoby (QP) Evropské unie pro náš systém kvality podle GMP a naši produkční zařízení. Navíc jsme úspěšně absolvovali první certifikační audity Systému řízení kvality ISO9001, Systému řízení životního prostředí ISO14001 a Systému řízení bezpečnosti a ochrany práce ISO45001.