Vlastná syntéza saRNA
Samovynásobivá mRNA (saRNA), tiež známa ako replicon RNA, kódova pre sekvencie in vitro transkripcie (IVT) mRNA a virálne replikázové geny odvodzené od alfavírusov alebo flavívirusov. Virálne replikázové geny umožňujú samovynásobenie mRNA, čo spôsobuje zvýšené vyjadrenie białok a minimálnu požadovanú dávku RNA v porovnaní s nevynásobnými mRNA. Ďalšou aspektom je, že saRNA je relatívne veľká molekula (viac ako 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma vyvinula sadu technológií na syntézu mRNA, ktorá poskytuje neamplifikujúcu sa mRNA a samy amplifikujúcu sa mRNA (1000 nt~14000 nt), ako sú návrh a optimalizácia postupnosti, IVT, čistenie, lyofilizácia a encapsulácia do lipidových nanocastic (LNP). Všetky produkty sú uvoľnené pod prísnymi štandardmi kontroly kvality.
Obr.1 Štrukturálne vlastnosti IVT mRNA: Konvenčné, kruhové a samy amplifikujúce sa mRNA.
Postupnostné vlastnosti samy amplifikujúcich sa mRNA
Samovzduchne RNA obsahuje štyri neštrukturálne proteiny (označované ako nsP1, nsP2, nsP3 a nsP4), ktoré sú odvodené z alfavírusov, konkrétne z venezuelského vírusu encefalitídy koní (VEEV). Medzi nimi nsP1 prejavuje dvojité enzymatické aktivity, konkrétne GTase a N7MTase, zatiaľ čo nsP2 má RTPase aktivitu, ktorá je kľúčová na zakončenie IVT mRNA na vytvorenie Cap 0 štruktúry. Okrem toho nsP2 slúži ako proteáza a helikáza, čím usnadňuje komplexné spracovanie celého kompleksu nsP. Presná funkcia nsP3 zostáva nejasná, avšak interaguje s rôznymi proteínmi hostiteľskej bunky, čím prispeva k oslabeniu protivírusovej odpovede hostiteľa.
V oblasti subgenomického promotéra (SGP) alfavírusov sa nachádza pred genom záujmu (GOI). Prvok SGP umožňuje spustenie transkripcie GOI, preskočením čítania postupnosti kodujúcej virálne proteiny nsP.
Obr.2 Syntéza a bunkové testy eGFP saRNA platformy Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Špecifické riešenia saRNA
Protokol syntézy saRNA je podobný mRNA: Vlastná syntéza mRNA
- Návrh sekvencie
- Príprava plazmidového šablónu
- transkripcia in vitro (IVT)
- enzymatické uzavretie mRNA
- kopreparácia mRNA s kapaním
- čistenie mRNA
- liofilizácia mRNA
- LNP Encapsulation
- Analýza a testovanie
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
