Nel processo di preparazione dell'mRNA di trascrizione in vitro (IVT), è richiesto il DNA plasmidico linearizzato come modello di trascrizione per l'IVT con l'aiuto della RNA polimerasi T7. Il DNA plasmidico di alta qualità è fondamentale per la trascrizione in vitro.
Basandosi sulla piattaforma di servizi di preparazione di plasmidi matura, Yaohai Bio-Pharma può offrire un servizio di preparazione di DNA plasmidico linearizzato di elevata purezza e standard elevati per ottenere un'efficiente trascrizione IVT.
Dettagli sui servizi
| Processo | Servizio opzionale | i dettagli del servizio | Periodo di consegna (giorni lavorativi) |
| Preparazione del plasmide circolare | Sintesi genica | Sintesi genica (di terze parti) | 7-10 |
| Amplificazione plasmidica | Amplificazione plasmidica | 2 |
| Estrazione del plasmide |
| Preparazione del plasmide linearizzato | Linearizzazione e purificazione dei plasmidi | Linearizzazione dei plasmidi | 1 |
| Linearizzazione Purificazione del DNA |
| Controllo di qualità del DNA plasmidico | Purezza della concentrazione | Spettrofotometria ultravioletta (UV). | 1-2 |
| Conformazione plasmidica | Elettroforesi su gel di agarosio (AGE) |
| Elettroforesi capillare (CE)-opzionale |
| Identificazione del plasmide | Identificazione degli enzimi di restrizione/AGE |
Le nostre caratteristiche
- Plasmide modello ritagliabile
Selezione flessibile dei metodi di linearizzazione
Ottimizzazione dei metodi di estrazione e purificazione del DNA per ottenere tassi di recupero elevati.
- Controllo di qualità rigoroso
Standard rigorosi di controllo del processo, con un tasso di conformazione superelicoidale dei campioni di plasmidi per la ricerca superiore all'80%.
- Processo di piattaforma matura
Servizi di preparazione e controllo qualità di plasmidi di alto livello e ad alta efficienza per soddisfare le esigenze sperimentali.
Caso di studio
Prendendo come esempio il prodotto mRNA_luciferase del catalogo Yaohai Bio-Pharma, il campione di plasmide modello di trascrizione (grado di ricerca) ha un rapporto superelicoidale superiore al 90%, un rapporto di linearizzazione vicino al 100% e un successivo rapporto di trascrizione fino a 1:200 ( DNA plasmidico linearizzato:mRNA).
La mRNA_luciferasi ottenuta attraverso la preparazione di un plasmide linearizzato come modello viene trasfettata in cellule 293T e l'attività di reazione enzima-substrato viene valutata 24 ore dopo la trasfezione.
È possibile rilevare un chiaro e forte segnale di attività della luciferasi, ovvero la proteina luciferasi viene espressa in modo efficiente, suggerendo che la purezza del modello di trascrizione può soddisfare pienamente i requisiti di preparazione dell'mRNA di alta qualità.
Saggio del rapporto plasmidico superavvolto
Validazione dell'espressione dell'mRNA della luciferasi in vitro
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