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Progettazione di sequenze di mRNA

Progettazione di sequenze di mRNA

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RNA dell'IVT

Progettazione di sequenze di mRNA

Secondo il dogma centrale, l'RNA messaggero (mRNA) è il ponte per la trasmissione del materiale genetico dal DNA alle proteine.

L'mRNA svolge un ruolo biologico codificando proteine ​​in vivo e l'mRNA maturo negli organismi eucariotici è costituito da cinque componenti: 5' Cap (struttura del cappuccio), 5' UTR (regione non codificante), ORF (open reading frame), 3' UTR e coda 3' poliA (coda di poliadenilato).

indefinito

Dettagli sui servizi
Processo Servizio opzionale i dettagli del servizio Periodo di consegna (giorno)
Progettazione e ottimizzazione di sequenze di mRNA Progettazione e ottimizzazione di sequenze di codifica

Allineamento della sequenza CDS

Ottimizzazione del codone CDS

 1
Progettazione e ottimizzazione di sequenze non codificanti

Progettazione e ottimizzazione della sequenza UTR 5'

Progettazione e ottimizzazione della sequenza UTR 3'

Progettazione e ottimizzazione della sequenza polyA

 1-2
Opzioni personalizzabili
5' UTR/3' UTR
  • Sequenza UTR della natura
  • Sequenza UTR mutante/ingegnerizzata
Coda PolyA da 3'
  • 100A ~120A Coda (consigliato)
  • Coda poliA segmentata
  • Altra coda personalizzata
Strategie comuni per la progettazione di sequenze di mRNA
Componenti dell'mRNA Funzioni biologiche Strategie di ottimizzazione
Cap. 5' Proteggono l'mRNA dalla degradazione da parte delle esonucleasi e agiscono di concerto con la coda poliA all'estremità 3', la proteina legante poliA e la proteina del fattore di inizio della traduzione per avviare la traduzione della proteina. La struttura naturale Cap1 evita i recettori di riconoscimento del pattern e quindi riduce la risposta immunitaria naturale, che può essere ottenuta mediante capping co-trascrizionale in una fase o capping enzimatico in due fasi [vedere capping enzimatico dell'mRNA e capping co-trascrizionale per i dettagli].
5' UT Il 5'UTR può essere riconosciuto dai ribosomi, regolare la traduzione dell'mRNA e influenzare la stabilità dell'mRNA. Contengono sequenze Kozak senza una struttura secondaria molto stabile. Gli UTR naturali di geni altamente espressi sono preferiti per gli mRNA di trascrizione in vitro (IVT) come α-globina e β-globina.
CDS Regioni codificanti proteine ​​e sequenze codificanti per antigeni, anticorpi o altre proteine ​​funzionali. L'ottimizzazione dei codoni aumenta il livello di traduzione, notando che alcuni codoni non ottimali possono svolgere un ruolo nel ripiegamento delle proteine.
3' UT Regolare la traduzione e la stabilità dell'mRNA. Gli UTR naturali di geni altamente espressi sono preferiti per gli mRNA dell'IVT come l'α-globina e la β-globina.
Coda poliA da 3' Regolano l'espressione proteica e proteggono la struttura del cappuccio dalla degradazione. È richiesta una lunghezza adeguata (100-150 bp); la codifica della coda polyA sul plasmide modello di trascrizione garantisce una lunghezza della coda polyA più definita.
Le nostre caratteristiche
  • Selezione diversificata della fonte UTR

Fonti multiple di librerie UTR naturali e modificate altamente espresse; strategia matura di modifica dell'UTR;

  • Team di ottimizzazione CDS all'avanguardia

Collabora con un team di algoritmi AI professionale per completare l'ottimizzazione dei codoni.

  • Anche la distribuzione della coda polyA

Aggiungere sequenze di poliA secondo i modelli di DNA per controllare la lunghezza dell'mRNA in modo più preciso.

  • Combinazioni di ottimizzazione diversificate

Ottenere un'espressione efficiente dell'mRNA con bassa immunogenicità.

Caso di studio

Progettazione della sequenza di un mRNA a doppio reporter: mRNA mCherry-eGFP

Il servizio mRNA di Yaohai Bio-Pharma continua a essere aggiornato con la progettazione e l'ottimizzazione di una sequenza tandem di geni reporter doppi, che raggiunge la coespressione di geni doppi.

Utilizzando un reagente di trasfezione convenzionale, l'mRNA della sequenza tandem del doppio gene mCherry-eGFP viene trasfettato in cellule 293T e due segnali fluorescenti di mCherry (rosso) e della proteina fluorescente verde potenziata (eGFP) vengono rilevati con espressione simultanea dopo 48 ore e l'mRNA impilato il grafico è evidenziato in giallo.

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Espressione dell'mRNA di mCherry-eGFP nella cellula 293T

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