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Sviluppo del processo di mRNA

Sviluppo del processo di mRNA

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RNA dell'IVT

Sviluppo del processo di mRNA

L'importanza dello sviluppo del processo di mRNA
  • DNA plasmidico circolare (pDNA), come materiale di partenza, dovrebbe essere completamente linearizzato per produrre un trascritto di RNA di lunghezza definita.
  • Come strategia di sintesi comune per le molecole di RNA, trascrizione in vitro (IVT) ci consente di ottenere trascrizioni personalizzate in modo efficiente. L'IVT è una reazione complessa che richiede una miscela di modello di DNA, RNA polimerasi, inibitore della RNasi, pirofosfatasi inorganica, cofattori, nucleosidi trifosfati (NTP) non modificati o modificati e tampone per produrre trascrizioni di mRNA. La resa ideale dell'RNA non può essere ottenuta con un'unica soluzione, poiché dipende da vari fattori di reazione. Inoltre, la reazione IVT può dipendere dalla sequenza.
  • Dopo la reazione IVT, il impurità legate al prodotto e al processo (ad esempio, dsRNA, frammenti di RNA troncati, modello di DNA, NTP e RNA polimerasi) devono essere rimossi per ottenere mRNA puro come ingrediente farmaceutico attivo (API).
Soluzioni di processo mRNA di Yaohai Bio-Pharma

I nostri servizi generali di sviluppo del processo mRNA disponibili includono:

  • Sviluppo e ottimizzazione del processo plasmidico lineare
  • Sviluppo e ottimizzazione del processo IVT
  • Sviluppo e ottimizzazione del processo di purificazione dell'mRNA
Metodologia

Qualità in base alla progettazione (QbD)

Progettazione dell'esperienza (DoE)

Un fattore alla volta (OFAT)

i dettagli del servizio
i dettagli del servizio Operazioni di unità parametri
Digestione monoenzimatica Reazione di digestione Componenti della reazione, volume, velocità di rotazione
Purificazione del DNA linearizzato IEX, cromatografia a scambio anionico o cationico Tipi di resina/colonna per cromatografia: composizione del tampone, composizione della fase mobile, pH, velocità di flusso, condizioni di legame, lavaggio ed eluizione.
RPC, cromatografia a fase inversa
Sintesi dell'mRNA mediante IVT Reazione IVT Componenti della reazione IVT, volume, velocità di rotazione, tempo IVT
Rimozione del DNA Concentrazione di DNasi
Tappatura enzimatica Reazione di tappatura Componenti della reazione, volume, velocità di rotazione
Purificazione dell'mRNA AC, cromatografia di affinità Diversi tipi di resina/colonna per cromatografia (ad es. AC, IEX, RPC, SEC, MMC), composizione del tampone, volume di iniezione, composizione della fase mobile (adsorbimento e desorbimento), pH, velocità di flusso, condizioni di legame, lavaggio e eluizione.
Cromatografia IEX, anionica o a scambio cationico
SEC, dissalazione e/o cromatografia ad esclusione dimensionale
RPC, cromatografia in fase inversa
MMC, cromatografia in modalità mista
Filtrazione a flusso tangenziale Materiale della membrana e dimensione dei pori, portata di alimentazione, pressione transmembrana (TMP), rapporto tra volume del filtrato e area della membrana
Cronologia delle soluzioni mRNA CDMO

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