La base dell'incapsulamento è la progettazione e lo sviluppo del sistema di consegna. Un sistema di rilascio ben progettato consente alle molecole di circRNA di entrare nel corpo senza essere degradate dagli enzimi RNA e quindi di essere effettivamente consegnate al sito bersaglio, attraversare la membrana cellulare ed essere rilasciate a livello intracellulare.
Le nanoparticelle lipidiche (LNP) sono il miglior sistema di rilascio disponibile, con vantaggi in termini di incapsulamento, espressione in vivo e sicurezza in vivo rispetto ad altri sistemi di rilascio. Gli LNP con frammenti di acido nucleico vengono facilmente inghiottiti nelle cellule e formano corpi intracellulari. Una volta entrato nella cellula, l'ambiente acido del corpo intracellulare protona e carica positivamente la testa del lipide ionizzato, fondendosi così con la membrana interna del corpo intracellulare e rilasciando l'acido nucleico bersaglio nella cellula per l'azione.
Il servizio circRNA di Yaohai Bio-Pharma continua a migliorare ed è in grado di fornire un servizio di incapsulamento circRNA-LNP per ottimizzare i parametri di processo critici rilevanti e migliorare la coerenza e la riproducibilità della produzione di farmaci circRNA.
Processo | i dettagli del servizio | Periodo di consegna (giorno) | Risultati finali |
Incapsulamento circRNA-LNP | Pretrattamento materiali e liquidi | 2 | Prodotto farmaceutico circRNA-LNP (DP) |
Miscelazione di dispositivi microfluidici | |||
Filtrazione a flusso tangenziale | 1 | ||
Filtrazione sterilizzante | |||
controllo di qualità del circRNA-LNP | Efficienza di incapsulamento | 1 | Rapporto di prova |
Granulometria e indice di polidispersità | |||
potenziale Zeta |
Sintesi rapida, elevata efficienza di ricerca e sviluppo e soluzioni pre-ottimizzate;
Il rapporto di incapsulamento può raggiungere oltre il 90%;
La dimensione delle nanoparticelle lipidiche può essere controllata modificando la velocità e il rapporto di iniezione del fluido;
I prodotti circRNA-LNP sono convalidati mediante espressione cellulare in vitro e possono esprimere la proteina bersaglio in modo efficiente.
Vengono preparati campioni di circRNA LNP-eGFP e le loro diverse dosi (1ug, 2ug e 4ug) vengono trasfettate direttamente in cellule 293T per verificare se possono esprimere la proteina bersaglio. Dopo 48 ore dalla trasfezione, è possibile osservare un chiaro segnale fluorescente e vi è un effetto di aumento della dose dell'intensità della fluorescenza.
Lipo-circ_eGFP, costituito da liposomi e circRNA eGFP non incapsulato, viene preso come controllo.