Per quanto riguarda la produzione di massa di mRNA, la trascrizione in vitro (IVT) è un metodo più efficiente e maturo. La reazione IVT adotta DNA plasmidico linearizzato contenente il promotore T7 come modello e l'mRNA viene sintetizzato con nucleosidi trifosfati (NTP) come substrati in presenza della RNA polimerasi T7.
La modificazione nucleotidica rappresenta una svolta nell'esplorazione dell'mRNA, in cui le molecole di mRNA non modificate vengono riconosciute dai sensori di RNA intracellulari per attivare l'immunità innata. Per considerazioni sull'immunogenicità in vivo dell'mRNA e sull'efficienza della traduzione, il processo IVT impiega solitamente alcuni tipi di NTP modificati e i nucleotidi modificati comuni sono pseudouridina (Ψ), N1-metil-pseudouridina (N1Ψ) e 5-metilcitosina (5mC).
Processo di trascrizione in vitro dell'mRNA
Diagramma di reazione della trascrizione in vitro (IVT).
Dettagli sui servizi
Servizio opzionale | i dettagli del servizio | Periodo di consegna (giorni lavorativi) |
Trascrizione in vitro (IVT) | IVT, Trascrizione in vitro | 1 |
| Modifiche nucleotidiche (Ψ/N1Ψ/5mC, ecc.) |
| Rimozione del modello di DNA (DNasi I) |
Ottimizzazione delle condizioni IVT - opzionale | Progettazione e ottimizzazione dei componenti di reazione IVT | 2-5 |
Le nostre caratteristiche
- Strategie diversificate di modifica dei nucleotidi
Migliora la stabilità dell'mRNA e l'espressione proteica in vivo.
- Progettazione e ottimizzazione rigorosa dei test
È possibile ottenere la preparazione di frammenti di mRNA fino a 10kb.
Ottimizzando le condizioni di reazione IVT, il tasso di trascrizione arriva fino a 1:200.
- Controllo rigoroso della RNasi
Un controllo rigoroso dell'RNasi attraverso un ambiente sperimentale e materiali di consumo può prevenire efficacemente la degradazione dell'mRNA.
Argomento di studio
L'attuale sistema di reazione IVT è approssimativamente ottimizzato per sistemi sintetici con una lunghezza di circa 100 nt, non per mRNA di lunghezza arbitraria. Più lunga è la sequenza dell'mRNA, più difficile è la trascrizione e più è incline alla degradazione.
Per preparare sequenze di mRNA personalizzate con una lunghezza di circa 10 kb, Yaohai Bio-Pharma ha preparato con successo campioni di alta qualità con un elevato rapporto di trascrizione di 1:135 e ha ottenuto 135 μg di prodotti di mRNA inizialmente purificati dopo 1 μg di plasmide linearizzato è stato trascritto in vitro attraverso un rigoroso disegno sperimentale, una continua ottimizzazione delle condizioni di reazione e uno stretto controllo della RNasi.
Identificazione dell'mRNA (elettroforesi su gel di agarosio)
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